175883. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új szukcimid-észterek előállítására
n 175883 12 Reakcióidő: 12 óra, hőmérséklet: 44 °C. 6 g akril-amidot, 0,5 g N,N’-metilén-bisz(akrilamidot és 0,6 ml 1%-os CoCl2 oldatot 22,5 ml pH = 8,3, 1 mólos trisz-pufferben oldunk. A vinilezett enzimoldat hozzáadása után a polimerizációt 5%-os ammóniumperoxidszulfát és 5%-os 3-dimetil-amino-propionitril-oldat 1,5—1,5 ml-ével beindítjuk. A kapott gélt 0,4 mm lyukméretű szitán nyomjuk át, és 1 mólos, 7,5 pH-jű foszfátpufferrel eluáljuk oszlopon. 1. eluátum 2 liter puffer 1,88% aktivitás a gél fajlagos az eluátumban aktivitása 193,1 U/g 2. eluátum 2 liter puffera gél fajlagos aktivitása 193,1 U/g Aktivitás-kitermelés: 6,9%. A példát megismételjük úgy, hogy a találmány szerinti vegyület helyett akrilsavkloridot használunk. Ebben az esetben a hordozó aktivitása 0. 9. példa A glukózoxidáz (GOD) rögzítése a találmány szerinti vegyülettel végzett 2 lépcsős reakcióval és azt követő kopolimerizációval A 8. kiviteli példában leírt módon kb. 210U/mg fajlagos aktivitású GOD-t a 4-kiviteli példa szerint előállított vegyülettel előinkubálunk, majd egy kis mennyiségű, az 1. kiviteli példában leírt módon előállított vegyületet adunk hozzá. Ezután további 24 órán át állni hagyjuk, majd a 8. kiviteli példában leírt módon végrehajtjuk a kopolimerizációt. A kapott gél aktivitása 290 U/g. A kísérletet megismételjük azzal a különbséggel, hogy a találmány szerinti vegyület helyett akrilsavkloridot használunk. Az aktivitás ebben az esetben 235 U/g. 10. példa Angiotenzin kötése marha-szérumalbuminra 25 mg angiotenzint 10 ml 1:1 arányú dioxán-víz elegyben oldunk, és az oldathoz a 4. kiviteli példában leírt módon előállított vegyület 6 mg-ját adjuk dioxánban oldva. Ezután az elegy pH-ját 5%-os K2C03-oldat hozzáadásával 8,0-ra állítjuk be, majd szobahőmérsékleten 2 napon át keverjük. A terméket tetrahidrofurán hozzáadásával kicsapjuk, lecentrifugáljuk és liofilizáljuk. Kitermelés: 19,6 mg. A fenti közbenső termék 19,6 mg-jának pH-ját 4-re állítjuk be, és 1 órán át keverjük. Ezután a pH-t újra 8,0-ra növeljük, majd 16,6 mg marha-szérumalbumin oldatát adjuk hozzá. 1 órás keverés után ' 1 mg nátrium-bór-hidridet adunk hozzá. További 20 perc múlva mégegyszer 1 mg nátrium-bór-hidridet adunk hozzá. További 60 perc múlva a reakció befejezettnek tekinthető. Az oldatot bepároljuk, abszolút etanolban feloldjuk, szűrjük, vizet adunk hozzá, majd 4 napig dializáljuk. A dializá tűmből 24,1 mg liofilizált anyagot kapunk. Ebből következik, hogy egy molekula marha-szérumalbumin legalább 24 molekula angiotenzinnel kötődik. 11. példa Me takriloil-hí droxi-karbonsav-hi droxi-szukcinimid-észter kopolimerizációja metakrilamiddal Mindkét monomer oxigénmentes, 1 mól/dm3 koncentrációjú oldatát készítjük el absz. tetrahidrofuránnal (az észter : amid monomerarány 1 : 5). A polimerizációt úgy hajtjuk végre, hogy 0,8 mól/mól % azoizovajsav-dinitrilt adunk 58 °C-on az elegyhez. 4 óra múlva a polimerizációt hűtéssel (jégfürdőbe merítéssel) befagyasztjuk, és a kicsapódott polimert leszívatjuk. Vízben ismét feloldjuk, és acetonbá csepegtetve kicsapjuk. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás I általános képletű hidroxi-szukcinimid-észterek — mely képletben X jelentése egy további karboxi-szukcinímid-észter-csoport, vagy valamely II, III vagy IV általános képletű csoport, A jelentése -0-CH2-CH2- csoport akkor, ha n jelentése 2 ,és X jelentése egy további szukcinimid-észter-csoport, különben pedig egy egyszeres kötés, n jelentése 2, 3, 4, 5, 6 vagy 7, m jelentése 1, 2, 3 vagy 4, R jelentése hidrogénatom, metil- vagy cianidcsoport, R’jelentése metil- vagy etilcsoport ~ előállítására, azzal jellemezve, hogy a hidroxi-szukcinimid-észtemek megfelelő mono- vagy dikarbonsavat a) önmagában ismert módon valamely reakcióképes származékává, így savkloridjává, vagy vegyes anhidridjévé alakítjuk át, és ezt a reakcióképes savszármazékot szerves oldószerben N-hidroxi-szukcinimiddel reagáltatjuk, vagy b) poláros szerves oldószerben N-hidroxi-szukcin imiddel közvetlenül kondenzáljuk az^ N-hidroxj -szukcinimiddel ekvimoláris mennyiségű ciklohexil karbodiimid jelenlétében, vagy 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
