175883. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új szukcimid-észterek előállítására
5 175883 6 azonban gyökösen működő térhálósitószerek, mint például bizonyos szerves peroxidok is. Heterogén fázisban végzett polimerizációnál, tehát szuszpenziós vagy emulziós polimerizációnál használhatók például vízben oldhatatlan térhálósitószerek, mint divinil-benzol és etilén-dimetakrilát. Számos egyéb térhálósítószer is ismeretes a szakember számára, és a konkrét esetben használandó térhálósítószer kiválasztása a szakember feladata. Az is lehetséges, hogy a térhálósítószert csak utólag adagoljuk be, és a térhálósítást csak azután végezzük el, miután a polimer hordozó előállítása és annak aktív proteinhez kötése már megtörtént. Ha a képződött polimer térhálósítását elhagyjuk, akkor oldódó vagy hőrelágyuló hordozóanyagokat kapunk. Ezek fonásra vagy extrudálható oldatok céljára használhatók, amelyekből a hordozóanyagra kötött proteinek, például szálak vagy fóliák alakjában nyerhetők, önmagukban ismert módszerekkel. Hidroxilcsoportokat tartalmazó hordozóanyagokon való megkötésre különösen olyan, I általános képletű vegyületek alkalmasak, amelyekben X valamely IV általános képletű csoport. Ebből a csoportból ugyanis szerves oldószerekben, mint például dimetil-szulfoxidban, kb. 100°C-on végzett hevítés során dietil-amin lehasadása mellett a megfelelő, IVa képletű izocianát képződik, amely 0 °C-on hidroxilcsoportokkal reagál. Ilyen körülmények között a hidroxi-szukcinimid-észter-csoport (OSu-észter) még nem reagál, úgyhogy a molekula két funkcionális csoportja szelektív reagálásának lehetőségei a kísérleti körülmények megválasztása útján adottak. Az olyan I általános képletű vegyületeket, amelyekben X valamely II általános képletű csoport, először a HOSu-csoporton keresztül egy aminocsoport-tartalmú kis- vagy nagymolekulás anyaggal reagáltatjuk, majd ezután enyhén savas vizes oldatban visszük további reakcióba. Ilyen körülmények között az acetálból a szabad aldehid képződik, amely azután a szakemberek által ismert módon továbbreagál például aminocsoportokkal valamely Schiff-féle bázis képződése közben, amelyet azután kovalens kötés képződése közben például nátrium-bór-hidriddel vagy analóg reakcióban hidroxil-amin-, hidrazin- és szemikarbazid-származékokkal redukálunk. Hasonló anyagként továbbá olyan szilárd anyagok is használhatók, amelyek nem rendelkeznek a találmány szerinti vegyületek funkcionális csoportjaival reagálni képes helyekkel. Ilyen esetekben a találmány szerinti vegyületeket térhálósítószerként használjuk. Dyen esetben célszerűen először az aktív proteint felvisszük a hordozóanyag felületére (például adszorbeáltatással), rárétegezzük a protein oldatát, majd következik a felületen történő rögzítés valamely találmány szerinti vegyülettel végzett térhálósítás útján, mimellett előnyösen csak homodifunkciós vegyületeket, vagyis olyan vegyületeket használunk, amelyekben X jelentése egy további karboxi-szukcinimid-észter-csoport. Használhatunk a térhálósításra azonban olyan vegyületeket is, amelyekben X jelentése IV általános képletű csoport. A találmány szerinti vegyületek alkalmazási módjának egy további előnyös módja abban áll, hogy a biológiailag aktív proteint mind homodifunkciós, mind heterodifunkciós 1 általános képletű vegyülettel reagáltatjuk. Így például a proteint először olyan vegyülettel reagáltatjuk, amelyben X valamely III általános képletű csoport. Ez kopolimerizációra képes csoportok bevezetéséhez vezet. Ezután térhálósodni képes, előnyösen homodifunkciós vegyületet adunk hozzá, amelyben X is egy további, karboxi-szukcínimidoészter-csoport. Ez térhál ósodáshoz, vagyis több molekula egymással való összekapcsolódásához vezet. Ez a több proteinegységből álló komplex-képződmény azután a fent leírt módon a rajta függő, kopolimerizációra képes csoportok révén a protein-kopolimerizáció fentiekben leírt módszereivel hordozóanyagon rögzíthető. Az is lehetséges, hogy egy kopolimerizációra képes csoport helyett egy II vagy IV általános képletű csoportot vezetünk be ezzel a módszerrel, és ezt kötjük egy már előzőleg előre elkészített hordozóra. Egy további variáns szerint először több proteinmolekula egymáshoz kötésével térhálósítjuk a proteint, és csak azután végezzük el a rögzítést a hordozón ugyanazzal, vagy egy másik, I általános képletű vegyülettel. A találmány szerinti vegyületekkel kovalens kötéssel köthető biológiailag aktív proteinek enzimatikusan aktív proteinek, immunológjailag aktív proteinek, mint antitestek, immunglobulinek és hasonlók, valamint hormonálisán aktív proteinek. A találmány szerinti új vegyületek kitűnnek olyan proteinekkel szembeni reakcióképességükkel, amelyek vizes vagy vizes-szerves oldószeres oldatban, biológiai aktivitásuk messzemenő megtartása, valamint kopolimerizálható kettőskötésekkel, hidioxi- és aminocsoportokkal, valamint egyéb hordozóanyagokon jelenlevő, proteinek számára alkalmas csoportokkal szembeni reakcióképességük messzemenő megtartása mellett kovalens kötések létesítésére alkalmasak. Ezeknek az észtereknek további előnye, hogy jól kristályosíthatok, és ezért könnyű őket tisztán izolálni. Képesek bizonyos körülmények között olyan hordozóanyagokkal kovalens kötéseket létesíteni, amelyeknél a proteinek biológiai aktivitása megmarad. Ezenkívül hidrofil vagy hidrofób tulajdonságaik kívánság szerint változtathatók. így például a szimmetrikus biszíhidroxi-szukcinimid-észterek) a mindenkori megfelelő mennyiségben alkalmazva felhasználhatók arra, hogy valamely proteint enyhén lúgos pufferben oldatba vigyünk. Az ilyen esetben nyert, térhálósított, biológiailag aktív proteinek vagy elválaszthatók például dialízissel, ultraszűréssel, vagy hasonló eljárással, szétválaszthatok például gélkromatográfiával, vagy további reakcióba vihetők például valamely hordozón történő megkötés, vagy egy hordozóanyagba történő bepolimerizáció útján. Ebben a tekintetben az etiiénglikolból levezethető, találmány szerinti vegyületek hidrofil tulajdonságuk miatt alkalmasabbak, mint az egyszerű dikarbonsav-hidroxi-szukcin imidoészterek. Jobb vízoldhatóságuk miatt gyorsabban reagálnak, és a biológiailag aktív protein denaturálódása visszaszorul. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
