175838. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a Corynebacterium glutamicum mikroorganizmustörzs szelekciójára
5 175838 6 kilengési frekvencia 91/perc) 28 C°-on 18—24 óra hoszszat rázattuk. A keletkezett tenyészet 50 ml-ét újabb táptalajba helyeztük és tovább tenyésztettük. A tenyésztést egy 2-literes edényben végeztük; a táptalaj mennyisége 800 ml volt és a következő anyagokat tartalmazta: szacharóz 180,0 g földimogyoró őrlemény savas hidrolizátuma 300,0 ml áztatott kukorica (65% száraz-anyag tartalom) 10,0 g kálium-dihídrogénfoszfát 2,0 g kristályos magnézium-szulfát 0,3 g kalcium-karbonát 20,0 g kristályos vas-szulfát 0,02 g kristályos mangán-szulfát 0,02 g biotin 0,004 g szójabab-olaj 3 ml víz 1000 ml A táptalaj pH-értéke 7,0 volt. Sterilizálás céljából a táptalajt 3 x 30 percig 121,5 kN/m2 (kPa) nyomáson tartottuk. A tenyészetet 0,8 liter/perc sebességgel levegőztettük , 8000 fordulat/perc sebességgel kevertük és 29 C°on tartottuk. A közegben levő szójabab-olaj megakadályozta a habosodást. A közeg pH-értékét 6 óránként ammónium-hidroxiddal 7,0-ra állítottuk be. A tenyésztés 30., 32., 54., 66. és 74. órájában a közeghez 50—50 ml 70%-os szacharózoldatot adtunk. A tenyésztést összesen 96 óráig végeztük. A keletkezett lizin mennyiségét lizin-dekarboxiláz segítségével manometriásan határoztuk meg. Ennek alapján 96 óra alatt 61,5 g/liter lizin termelődött. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás Corynebacterium glutamicum szelektálására, azzal jellemezve, hogy a kiindulási (szülő) mikroorganizmus-törzs tenyészetét 0,03 M és 0,08 M közötti. előnyösen 0,05 M töménységű etil-metánszulfonát-oldattal kezeljük 15—21, előnyösen 18 órán keresztül, majd az így kezelt sejt-szuszpenziót önmagában ismert módon táptalajba oltjuk, és ezután a keletkezett mutánsokat S-(2-aminoetil)-L-ciszteint és L-homoszerint tartalmazó minimál-táptalajon inkubálva önmagában ismert módon elkülönítjük. (Elsőbbsége: 1978. szeptember 22.) 2. Eljárás Corynebacterium glutamicum szelektálására, azzal jellemezve, hogy a kiindulási (szülő) mikroorganizmus-törzs tenyészetét 0,05 M töménységű etil-metánszulfonát-oldattal kezeljük 18 órán keresztül, majd az így kezelt sejt-szuszpenziót önmagában ismert módon táptalajba oltjuk, és ezután a keletkezett mutánsokat S-(2-aminoetil)-L-ciszteint és L-homoszerint tartalmazó minimál-táptalajon inkubálva önmagában ismert módon elkülönítjük. (Elsőbbsége: 1977. szeptember 24.) 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az inkubálást milliliterenként 10 mg S-(2-aminoetil)-L-ciszteint és 0,001 mg L-homoszerint tartalmazó minimál-táptalajon végezzük. (Elsőbbsége: 1978. szeptember 22.) 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az etil-metánszulfonát-oldatot 7,2pH-értékü foszfát-pufferral készítjük. (Elsőbbsége: 1978. szeptember 22.) 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az inkubálást milliliterenként 10 mg S-(2-aminoetil)-L-ciszteint és 0,001 mg l-homoszerint tartalmazó minimál-táptalajon végezzük. (Elsőbbsége: 1977. szeptember 24.) 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az etil-metánszulfonát-oldatot 7,2pH-értékű foszfát-pufferral készítjük. (Elsőbbsége: 1977. szeptember 24.) 5 10 15 20 25 30 35 40 A kiadásírt felel: a Közgazdasági ás Jogi Könyvkiadó igazgatója 81.660.66-42 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkő István igazgató 3
