175826. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenolok és oligoszacharidok extrakciójára növényi szövetekből
9 175826 10 A használt liszt összetétele a következő : nedvesség 10,6% szaraz anyagra számítva : fehérje (N.6,25) lipidek klorogénsav kaffeinsav szacharóz raffinóz nyersrost 58,7% 1,0%-nál kisebb 1,56% 0,14% 4,70% 3,32% 4,2% 5 10 200 gramm zsírmentesített napraforgómaglisztet egy lombikban összekeverünk 400 ml oldószerrel, amelyet 92 rész n-butilalkoholból és 8 rész vizes, 0,5 • 10 2N sósav-oldatból állítottunk elő. Az extrakciós eljárás idő- 15 tartama 15 perc 25 °C-on kevertetés közben. A szuszpenzió pH-ja kezdetben 6,2; az extrakció alatt ezt 5,0- ra állítjuk be és ezen az értéken tartjuk kismennyiségű 0,5N sósav adagolásával. A szuszpenziót vákuumban Büchner-tölcséren szűrjük Whatman No. 3 szűrőpapír 20 felhasználásával és a szilárd maradékkal ismételt extrakciókat hajtunk végre, összesen nyolc extrakciót (az összliszt/oldószer arány 1/160). Az izolátum színe világos krémfehér. c) Fehérjeizolátumok előállítása kétlépéses extrakcióval. I. 10 gramm fehérjekoncentrátumot hozzáadunk 150 ml pH 6,5 vizes oldathoz (a liszt/oldószer súly/térfogat arány 1/15) és 30 percen át 25 °C-on kevertetjük. A szuszpenzíó pH-ját 6,5 állandó értéken tartjuk kismenynyiségű 0,02N NaOH adagolásával. A szuszpenziót 17 000 ford./perc sebességgel 20 percen át centrifugáljuk és a maradékot ugyanilyen körülmények között ismét extrakciónak vetjük alá. A két egyesített fehérjeoldatot 0,5N HCl-val pH 4,0-n kicsapjuk. A csapadékot 17 000 ford./perc sebességgel 10 percen át való centrifugálással elkülönítjük, pH 4,0 savas vízzel mossuk, ismét szuszpendáljuk vízben, pH 7,0-ra semlegesítjük és esetleg fagyasztva szárítjuk. Az I. izolátum fehér színű. II. Az előző eljárásból származó oldhatatlan maradékból a fehérjéket lúgos közegben — pH 9,5 — ugyanolyan körülmények között extraháljuk, amint azt az egylépéses fehérjeextrakciós eljárás ismertetése során leírtuk. A kapott terméket 3 órán át nitrogén-atmoszférában 25 szárítjuk, összetétele a következő: nedvesség 12,2 % száraz anyagra számítva : fehérje (N.6,25) klorogénsav kaffeinsav szacharóz raffinóz nyersrost 72,9% 0,05/ 0,05°/ 0,01%-nál 0,05%-nál 4.8% ,-nál ,-nál kevesebb kevesebb kevesebb kevesebb A klorogénsav, kaffeinsav, szacharóz és raffinóz mennyisége alacsonyabb, mint az alkalmazott módszerek érzékenységi határai. Ezt a terméket magas fehérjetartalmára tekintettel (72,9%) fehérjekoncentrátumnak nevezzük ; ez láthatóan mentes az oligoszacharidoktól és a fenolos komponensektől, amelyek felelősek a fehérjék lúgos közegben végzett extrakciója során keletkező zöld színért. A koncentrátumból extrahált fehérjék poliakrilamid-gélen végzett elektroforetikus elemzése arra mutat, hogy ezek elektroforetikus viselkedése ugyanolyan, mint a napraforgómaglisztből izolált fehérjéké. b) Fehérjeizolátumok előállítása egylépéses extrák - cióval. 10 gramm fehérjekoncentrátumot 150 ml pH 9,5 vizes lúgoldatban szuszpendálunk (liszt/oldószer arány 1/15, súly/térfogat) és 30 percen át 25 °C-on kevertetjük. A szuszpenzió pH-ját az extrakció teljes ideje alatt 9,5 értéken tartjuk kismennyiségű híg NaOH oldat adagolásával. A szuszpenziót 17 000 ford./perc sebességgel 20 percen át centrifugáljuk és a maradékot a fenti körülmények között újabb extrakciónak vetjük alá. A két fehérjeoldatot egyesítjük és pH 5,2-n 0,5N HCl-vel kicsapjuk. A csapadékot 17 000 ford./perc sebességgel való centrifugálással elkülönítjük, pH 5,2 savas vízzel mossuk, ismét szuszpendáljuk vízben, pH 7,0-ra semlegesítjük, majd fagyasztva szárítjuk. Az egylépéses extrakciós módszerrel előállított izolátum, felül úszó és oldhatatlan maradék fehérjetartalmát a II. táblázatban mutatjuk be. 30 35 40 45 50 55 60 65 A kétlépéses extrakciós eljárásból származó izolátumok, felül úszó és oldhatatlan maradék fehérjetartalmát a II. táblázatban mutatjuk be. A II. izolátum világos krémfehér színű. II. táblázat Fehérjeextraktumok előállítása egylépéses és kétlépéses módszerrel egy o-difenoloktól és erjeszthető oligoszacharidoktól mentes napraforgómag-koncentrátumból KONCENTRÁTUM fehérje N % extrakciós eljárás pH 72,9 egylépéses I. NaOH 9,5 71,9 kétlépéses I. h 2o 6,5 II. NaOH 9,5 IZOLÁTUM pH fehérjekitermelés % fehérje-N szín 5,2 60,6 95,4 világos krém 4,0 5,6 83,3 fehér 5,2 57,1 98,8 világos krém FELÜLÜSZÓ MARADÉK fehérje-kitermelés % 10,5 26,9 5,0 4,1 26,3 A fehérje-nitrogén értéke: össz-N.6,25 5
