175575. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kanamicin-származékok előállítására
17 175575 18 Csőszám Eluálószer Mennyiség Rf Megjegyzés 4 0,3 normál ammóniumhidroxid 27 mg 0,33 inaktív 19—24 0,5 normál ammóniumhidroxid 38 mg 0,33 inaktív, valószínűleg egy helyzetizomer 50—54 1,0 normál ammóniumhidroxid 35 mg 0,37 a kívánt termék BB—K 162 Csőszám Eluálószer Mennyiség Rf Megjegyzés 7—8 0,5 normál ammóniumhidroxid 5 mg 0,21 inaktív 9 0,5 normál ammóniumhidroxid 9 mg 0,21 és 0,29 két komponens elegye 10—14 0,5 normál ammóniumhidroxid 24 mg 0,29 a kívánt termék Az 50—54. frakciót egyesítjük, és szárazra desztillál- 20 juk, így 35 mg (6,8%) kívánt bioaktív termékhez (a BB=K 162-höz) jutunk, olvadáspont: 178—185 °C (bomlik), vK=r 1630 cm1. 5. példa l-N-[L-(—)-8-Amino-a-hidroxi-valeril]-6'-N-metil-kanamicin A (BB—K 163) 30 94 mg (0,353 millimól) N-Cbz-L-y-amino-a-hidroxi-valeriánsav, 64,5 mg (0,353 millimól) N-hidroxi-5-norbornén-2,3-dikarboximid és 74,5 mg (0,353 millimól) diciklohexil-karbodiimid 5 ml száraz tetrahidro-furánnal készült elegyét éjszakán át 4 °C-on hagyjuk állni, 35 majd leszűrjük. 175 mg (0,351 millimól) 6'-N-metil-kanamicin A 10 ml 50%-os vizes tetrahidro-furánnal készült oldatához adjuk a szűrletet, majd 5 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük az elegyet. 70 mg 10%-os csontszenes palládium jelenlétében szobahőmérsékleten [40 hidrogénezzük a reakcióelegyet. Kiszűrjük a katalizátort, és a szűrletről ledesztilláljuk a tetrahidrofuránt. Amberlite CG—50 ioncserélő gyantával (NH4+-fázis, 20 ml) töltött oszlopon kromatografáljuk a nyert vizes koncentrátumot. Az oszlopot egymás után 50 ml víz- 45 zel, 250 ml 0,1 normál ammónium-hidroxid-oldattal, 450 ml 0,2 normál ammónium-hidroxid-oldattal, végül 400 ml 0,5 normál ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk. 10 ml-es eluátum-frakciókat szedünk. A bioaktív frakciókat egyesítjük, és szárazra desztilláljuk, így 40 50 mg nyersterméket nyerünk, amelyet CG—50 ioncserélő gyantával (réztetrammin-fázis, 1,5 ml) töltött oszlopon, 10 ml vízzel, majd 100 ml 0,5 normál ammónium-hidroxid-oldattal eluálva, 5 ml-es eluátum-frakciókat szedve újra kromatografálunk. 35 A 10—14. frakciót egyesítjük, és szárazra desztilláljuk, így 24 mg (11%) kívánt bioaktív anyagot, BB—K 163-at nyerünk, olvadáspont: 167—174 °C (bomlik), v*|r 1620 cm“1. 60 6. példa 1 6'-N-Metil-kanamicin B, BB—K 140 65 2,0 g (3,25 millimól) 6'-N-Cbz-kanamicin B 100 ml száraz piridinnel készült szuszpenziójához kevertetés közben 70 °C-on hozzáadunk 20 ml trimetil-szilil-kloridot, és 50 ml hexametil-diszilazánt, majd éjszakán át ugyanezen a hőmérsékleten kevertetjük az elegyet. Kiszűrjük a csapadékot, és száraz tetrahidro-furánnal mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékot egyesítve szárazra desztilláljuk. 80 ml száraz tetrahidro-furánban oldjuk az olajos maradékot. 4,4 g litium-alumínium-hidrid 200 ml száraz tetrahidro-furánnal készült szuszpenziójához csepegtetjük az oldatot, majd éjszakán át forraljuk az elegyet. Lehűlés után óvatosan jeges vízzel kezeljük a reakcióelegyet, 2 normál sósavval pH-ját 7-re állítjuk be, majd csökkentett nyomáson szárazra desztilláljuk. Etanollal alaposan kimossuk, majd 5 ml vízben feloldjuk a maradékot (2,7 g), és egy Amberlite CG—50 ioncserélő gyantával (NH4+-fázis, 40 ml) töltött oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot először 300 ml vízzel mossuk, majd 0,1 normál ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk. 10 ml-es eluátum-frakciókat szedünk, és ezeket ninhidrin folt teszttel, korongos tartalmi meghatározási módszerrel (B. subtilis PCI 219) és vékonyréteg-kromatográfiával (szilikagél lemez, futtatóelegy: kloroform—metanol—28%-os ammónium-hidroxid—víz 1 : 4 : 2 : 1 arányú elegye) analizáljuk. A vékonyrétegen Rf=0,47-nél ninhidrin-pozitív és bioaktiv foltot mutató 70—134. frakciót egyesítjük, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert, így 889 mg (55%) BB—K 140-et nyerünk, olvadáspont: 177—181 °C (bomlik), NMR (D20): 8 (ppm): 2,77 (3H, s, N—CH3). Analízis C19H39N5O|0.H2CO3 képletre: számított: C 42,93, H 7,39, N 12,52%, talált : C 42,93, H 7,13, N 11,86%. 7. példa l-N-[L-(—)-Y-Amino-a-hidroxi-butiril]-6'-N-metil-kanamicin B (BB=K 142) 253 mg (1 millimól) N-Cbz-L-y-amino-a-hidroxi-vajsav, 115 mg (1 millimól) N-hidroxi-szukcinimid és 206 mg millimól) diciklohexil-karbodiimid elegyét 3 órán át 5 °C-on keverjük, majd a reakció során kivált csapadékot kiszűrjük. 497 mg (1 millimól) 6'-N-metil-ka-9
