175489. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vakcinák előállítására
7 175489 8 1. táblázat Kiindulási Kapott vírusanyag szuszpenzió Neuraminidáz-aktivitás 549 nm hullámhosszúságon az optikai-sűrűség egységében 0,17 Fehérjeanyag (Lowiy-szerint (mg/ml) 5,5 A vírusszuszpenzióban jelenlevő tisztított vírusokat UV-sugárzással inaktiváljuk. A besugárzásnál a vírustartalmú folyadék vastagsága 0,1—0,5 cm, a fényintenzitás 380—400 erg/mm2 .s, az inaktiválást 5 percen át végezzük. Az előállított vakcina immunogenitását egereken vizsgáltuk 0,3 ml vakcina egyszeri intraperitoneális beadásával. Az antihemagglutinin átlagos titeije 1 :223. Az emberre gyakorolt immunogenitást 20 önkéntes jelentkezőn vizsgáltuk, mimellett mindegyiknek a szubkután módon 0,5 ml vakcinát adtunk be tű nélküli injekciózással. (Ennél a módszernél az injekciót nagy nyomás segítségével fecskendezzük be, a bőr átszúrása nélkül.) Az antitestek mennyisége átlagosan a 17,2-szeresére nőtt tünetek nem jelentkeztek. 2. példa Az A2 Viktória 36/72/H3N2 törzs influenzavírus allantoisz-tenyészetét, melynek titeije 640 RHA-egység. 3 cm átmérőjű és 50 cm magasságú, nátrium-boroszilikátüveggel töltött oszlopon gélkromatográflának vetjük alá. Az oszlop töltetének szemcsemérete 0,1-0,3 mm, pórusátmérője 1800 A, porozitása 1,6 cm2 /g. A vírusanyagot trisz-pufferral (pH = 7,5, nátriumklorid-koncentráció 0,85 súly% 0,5 cm/perc sebességgel eluáljuk. Az adszorpciót-elúciót és az izolálást az 1. példában leírt módon végezzük. A kísérlet eredményeként 200 ml tisztított vírusszuszpenziót kapunk, amely 50% kiindulási vírust tartalmaz. összehasonlító jellemzők: 2. táblázat Kiindulási Kapott vírusanyag szuszpenzió Neuraminídáz-aktivitás 0,03 0,4 Hemagglutinintiter 320 1280 Fehéije (mg/ml) 2,4 0,03 Az inaktiválást az 1. példában leírt módon végezzük. A kapott vakcina immunogenitását az 1. példában leírt módon egereken vizsgáljuk. Az átlagos antihemagglutinintiter 1 : 275. 3. példa Influenzavírus (szovjet törzs o9) aliantoisz-tenyészetét, melynek titerje 512 RHA-egység, adszorpdó-elúció útján formalinos eritrociton betöményítjük. Azután gélkromatográfiát hajtunk végre 3 cm átmérőjű és 50 cm magasságú, és szilikagéllel töltött oszlopon. A szilikagél szemcsemérete 0,16- —0,25 mm, pórusátmérője 450 Â és porozitása 1,3 cm3 lg. Az eluáláshoz felhasznált oldat pH-ja 7,5. A nátriumklorid koncentrációja 0,85 súly%. Megközelítően 100 ml tisztított vírusszuszpenziót kapunk, amely legalább 50% kiindulási vírust tartalmaz. összehasonlító adatok: 3. táblázat Kiindulási anyag Eluátum Kapott vírusszuszpenzió Hemagglutinin-titer 512 4196 1024 Fehéijeanyag Lowry szerint (mg/ml) 7 0,7 0,1 Az inaktivitással előállított vakcina immunogenitását az 1. példával analóg módon egereken vizsgáltuk. Az átlagos antihemagglutinin-titer 1 : 300. Szabadalmi igénypontok■ L Eljárás nem allergén, elölt, önmagában ismert vírusokat tartalmazó, legfejlebb 0,1 mg/ml fehérjetartalmú vakcina előállítására a kiindulási víruskultúra tisztítása, betöményítése, izolálása és inaktiválása útján, azzal jellemezve, hogy előnyösen az A2 Honkong (1)68 (amely 0617 számon lett deponálva), a B/USSR/018/74 (amely 1603 számon lett deponálva) és az A2 Viktória(3)75 (amely 2587 számon lett deponálva), vírustenyészet szuszpenzióját a) porózus, a virionokat nem szorbeáló, 50- -10000 A pórusátmérőjű szilikátanyaggal töltött oszlopon gélkromatográfiásan tisztítjuk, és adszorpció-elúció útján 2-1000-szeresre betöményítjük, vagy b) adszorpció-elúció útján 2-1000-szeresre betöményítjük, porózus, a virionokat nem szorbeáló, 50—10000 A pórusátmérőjű szilikátanyaggal töltött oszlopon gélkromatográfiásan tisztítjuk, vagy 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
