175474. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás 12ß-hidroxil-csoportot tartalmazó kardenolid vegyületek előállítására mikrobiológiai úton
7 175474 8 arányúra híguljon, és ettől kezdve a továbbiakban ezt az arányt tartjuk. Az 1550 ml és 1770 ml között összegyűjtött frakciók bepárlási maradékából 80%-os metanollal kristályos terméket nyerünk, amely vékonyréteg-kromatográfiás tulajdonságai 5 alapján a-acetil-digoxinnal azonosítható. A terméket preparatív vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel tovább tisztítjuk. Az így kapott analitikai tisztaságú a-acetil-digoxin op.-ja 224-229 °C, [«Id0 = 18,2° (c= 1%, piridin). 10 A hidrolízis után kapott genin fiziko-kémiai adatai megegyeznek az 1. példában leírt digoxigenin adataival. 3. példa Streptomyces praecox MNG 127 jelű törzs 5—6 hetes - burgonyakivonatot és glükózt tartalmazó — ferdeagaron nőtt tenyészetéről 10 ml steril 20 desztillált vízzel szuszpenziót készítünk. A szuszpenzió 1 —1 m!-ével 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban sterilezett 100—100 ml PS jelű (0,8% porszója-kivonatot és 3% glükózt tartalmazó) táptalajt oltunk. pH 7 (sterilezés előtt). Sterilezés 45 percen 25 át, 120°C-on. A glükózt a táptalajhoz 50%-os oldatban külön sterilezzük 30 percig 120°C-on. Porszója-kivonat készítése: 0,4 mm fonaltávolságú szitán átszitált, extrahált szójadarából csapvízzel készült 10%-os szuszpenziót 1 órán keresztül 30 1 atm. túlnyomáson hővel, majd 37 °C-ra hűtve 0,4% pankreatinnal 2 órán át állandó keverés közben hidrolizálunk, a pH-t nátrium-hidroxid oldattal 7,5 és 8,0 között tartva. A reakcióelegyet centrifugáljuk, majd a felülúszót porlasztva szárítjuk. Az 35 így készült porszója-kivonat nitrogéntartalma 9%. A beoltott lombikban a sugárgomba tenyésztését 32 °C-on olyan malomszita rázógépen végezzük, mely percenként 300-as fordulattal 2,5 cm kilengést végez. Az ilyen körülmények között 24 óra alatt kifejlődő 400 ml rázott tenyészettel 5 liter térfogatú PS jelű táptalajt oltunk 10 literes laboratóriumi üvegfermentorban. A táptalajhoz ez esetben a porszója-kivonaton és glükózon kívül 0,2%-nyi pálmaolajat is adunk a habzás megakadályozása céljából. A tenyésztést 32 °C-on 5 liter/perc steril levegő átáramoltatása mellett 350/perc fordulatszámmal keverve 1 napig folytatjuk. Ezután a tenyésztés hőmérsékletét 37 °C-ra emeljük, majd a tenyészethez 100 ml metanolban oldva és sterilre szűrve 2,5 g digitoxint adunk. Két nap inkubálás után a reakcióelegyet szűrjük, a szűrletet 2-szer 1/3 térfogat benzollal, majd utána 3-szor 1/3 térfogat kloroformmal extraháljuk. A kloroformos extraktum 750 mg digoxint és 440 mg 7|3-hidroxi-digoxint tartalmaz. Szabadalmi igénypont: Új eljárás I általános képletű kardenolid vegyületek előállítására — ahol R jelentése hidrogénatom vagy III általános képletű csoport, ahol R, jelentése hidrogénatom vagy acetil-csoport, X jelentése pedig hidrogénatom vagy hidroxil-csoport - mikrobiológiai úton, azzal jellemezve, hogy valamely II általános képletű kardenolid vegyületet — ahol R jelentése a fenti — Streptomyces praecox (MNG 127) törzs süllyesztett, levegőztetett és kevert tenyészetével vizes közegben érintkeztetünk, és a képződött hidroxilezett biológiailag aktív termékeket a reakcióelegyből ismert módon elkülönítjük. 1 ábraoldal A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 814738 - Zrínyi Nyomda, Budapest 4
