175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
65 175306 66 b) Di-Z-Lys-Arg(N02 )-Gly-OH előállítása 10 ml acetonban feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből 2,0 g-ot, majd a kapott oldathoz 5 jeges hűtés közben 2,1 ml 2 normál vizes nátrium-hidroxid-oldatot adunk. A keveréket ezután szobahőmérsékleten 2 órán át keverjük, majd 1,4 ml 1 normál sósavoldatot adunk hozzá, ezután pedig az acetont csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A 10 maradékot 10 ml vizzel hígítjuk, majd az oldhatatlan részt kiszűrjük. A szűrletet 1 normál sósavoldattal megsavanyítjuk, majd a kapott gélszerű csapadékot kiszűrjük. Így 1,78 g (9390 mennyiségben a 131-132,5 °C olvadáspontú cím szerinti 15 vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]p4 = -10,5° (c = 1, dimetil-formamidban). számított: C =52,84%, H =7,27%, N = 14,43%, talált: C =52,70%, H =7,31%, N = 14,72%. Aminosav-elemzés : Arg: 1,00 (1), Lys: 0,94 (1), Gly: 1,00 (1), Tyr: 1,00 (1), Phe: 2,06 (2), peptidtartalom 82%. 41. példa H—a,7—Dab—Arg—Gly—Phe-Phe-Tyr—NH2 előállítása a) Di—Z-a,7—Dab—Arg(N02)-Gly—OEt előállítása Elemzési eredmények a C30H40 O10Ng •1,5H20 képlet alapján: számított: C =51,49%, N = 16,02%, talált: C =51,43%, N = 16,23%. H =6,20%, H =5,92%, 20 25 c) Di—Z—Lys—Arg(N02 )—Gly—Phe—Phe— —Tyr—NH2 előállítása Pontosan a 39. példa c) lépésében ismertetett 30 módon járunk el 1,21 g di-Z-Lys-Arg(N02> -Gly-OH-t használva, amikor is gél formájában a cím szerinti vegyületet kapjuk 1,21 g (58%) mennyiségben. Olvadáspontja 199-203 °C, míg fajlagos forgatóképessége Hd* = -13,3° (c=l, di- 35 metil-formamidban). Elemzési eredmények a C57H<,80i jNi2 képlet alapján: számított: C = 58,75%, H =6,23%, N = 14,42%, talált: C =58,70%, H =6,26%, N = 14,72%, d) H-Lys—Arg—Gly—Phe—Phe—Tyr—NH2 előállítása 40 45 30 ml ecetsavban feloldunk a c) lépésben kapott vegyületből 1,00 g-ot, majd a kapott oldaton kata- 50 lizátorként palládiumkormot használva 20 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékot felvisszük egy l,8cm-szer 10 cm méretű, karboximetil-sephadex 55 gyantából készült oszlopra. Az oszlopot 500 ml 0,1 normál és 500 ml 1 normál vizes ammónium-acetát-oldattal lineáris gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 650 ml és 890 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk, így 468 mg (50%) mennyiségben 60 a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]p6 = —10,6° (c = 0,5,vízben). Elemzési eredmények a ■3C2H4O2 *4H2O képlet alapján: C41 Hs 7O7N11 • 65 40 ml dietiléterben 2,84 g di-Z—<*,7—Dab—OH-diciklohexilamint szuszpendálunk, majd a kapott szuszpenziót 0,5 normál kénsavoldattal rázzuk. Az éteres fázist ezután elválasztjuk, vízzel mossuk és vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószert ezután ledesztilláljuk, majd pontosan a 39. példa a) lépésében ismertetett módon járunk el, amikor is a cím szerinti vegyületet kapjuk gél formájában. A terméket ezután víz, etanol és etil-acetát elegyéből átcsapjuk. Így 2,36 g (70%) mennyiségben 153-156 C olvadáspontű terméket kapunk, amelynek fajlagos forgatóképessége [“Id = -9,4° (c = 1, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a CjoH4oOi0N8 képlet alapján: számított: C = 53,56%, H =5,99%, N = 16,66%, talált: C = 53,26%, H =5,84%, N = 16,24%. b) Di-Z-a,7-Dab-Arg(N02 )-Gly-OH előállítása 10 ml acetonban feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből 2,0 g-ot, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben cseppenként 2,97 ml 2 normál vizes nátrium-hidroxid-oldatot adunk. A keverékét ezután jeges hűtés közben 1 órán át keverjük, majd 3 ml 1 normál sósavoldatot adunk hozzá. Az acetont ezután ledesztilláljuk csökkentett nyomáson, majd a maradékhoz 10 ml vizet adunk. Az oldhatatlan részt kiszűrjük, majd a szűrletel 1 normál sósavoldattal megsavanyítjuk. A kivált gélszerű csapadékot kiszűrjük. Így 1,67 g (90%) terméket kapunk, amelynek olvadáspontja 112—113 °C, fajlagos forgatóképessége [a]^6 = -8,3° (c = 1,1, dimetil-formamidban) . Elemzési eredmények a C28Hj60ioN8 képlet alapján: számított: C =50,55%, H =5,76%, N = 16,89%, talált: C =50,53%, H =5,59%, N = 17,19%. 33
