175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
53 175306 54 fajlagos forgatóképessége [a]^1 = -20,0° (c = 1,0, dimetil-formamidbn). Elemzési eredmények a C39Hs0O9N1o,0,5H2O képlet alapján: számított: C = 57,69%, H =6,33%, N = 17,25%, talált: C = 57,86%, H =6,40%, N = 16,76%. b) H-e-Acap-Arg-Gly-Phe-Phe-NH, előállítása 30 ml ecetsavban feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből 400 mg-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 7 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk és a kapott maradékot felvisszük egy 1,8 cm-szer 10 cm méretű, karboximetil-sephadex gyantából készült oszlopra. Az oszlopot 500 ml 0,1 normál és 500 ml 1 normál vizes ammónium-acetát-oldattal lineáris gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 250 ml és 330 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így 200 mg (51%;) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]^2 = —9,9° (c = 0,6, vízben). Elemzési eredmények a CstEL^OjNç* •2C2H4O2’2H20 képlet alapján: számított: C =54,46%, N = 15,88%, H =7,49%, talált: C =54,24%, N = 15,76%. H =7,26%, Aminosa v-elemzés : Arg: 1,00 (1), Gly: 0,98 (1), Phe: 2,00 (2), e-Acap: nem meghatározva (peptidtartalom 79%). 34. példa H—Lys—Arg—Gly—Phe—Phe—NH2 előállítása a) Di-Z—Lys—Arg(N02)—Gly—Phe—Phe—NH2 előállítása A 30. példa e) lépésében ismertetett módon 0,80 g Z-Arg(N02)-Gly-Phe-Phe-NH2-t ecetsavas hidrogén-broinid-oldattal kezelünk, majd 10 ml dimetil-formamidban feloldunk. Az így kapott oldatot ezután trietil-aminnal semlegesítjük. Ugyanekkor 5 ml tetrahidrofuránban feloldunk 0,54 g di-Z-Lys-OH-t és 0,26 g HONB-t, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 0,30 g DCC-t adunk. A keveréket ezután 4 órán át keverjük, tnajd a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, a szűrletet pedig az előző bekezdésben ismertetett módon előállított aminkomponens dimetil-formamidos oldatához hozzáadjuk. A reakcióelegyet ezután egy éjszakán át keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékhoz vizet adunk. A kivált port kiszűrjük, alaposan szárítjuk, etil-acetáttal mossuk, végül pedig dimetil-formamid és etil-acetát elegyéből átcsapjuk. Így 0,82 g (77%) mennyiségben 200-204 °C olvadáspontú (bomlik) cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]^3 = — 20,5° (c=l,l, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C48H590i ibL ! • •0,5H2O képlet alapján: számított: C = 59,06%, H = 6,20%, N = 15,79%, talált: C =59,04%, H =6,13%, N = 15,78%. b) H—Lys—Arg—Gly-Phe—Phe—NH2 előállítása 30 ml ecetsavban feloldunk az a) lépésben kapott vegyületből 600 mg-ot, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 6 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, a szűrletet pedig csökkentett nyomáson bepároljuk. A kapott maradékot' felvisszük egy 1,5 cm-szer 11 cm méretű, karboximetil-sephadex gyantából készült oszlopra, majd az oszlopot 700 ml 0,1 normál és 700 ml 1 normál vizes ammónium-acetát-oldattal lineáris gradiens-eluálásnak vetjük alá. A 650 ml és 760 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így 280 mg (52%) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [a]ß3 = -4,3° (c = 0,5, vízben). Elemzési eredmények a C32H48O5N10* •3C2H402- 2H20 képlet alapján: számított: C = 52,52%, H = 7,42%, N =16,12%, talált: C =52,64%, H =7,38%. N = 16,42%. Aminosav-elemzés : Arg: 1,06 (1), Lys: 1,09 (1), Gly: 1,00 (1), Phe: 1,97 (2), peptidtartalom 73%. 35. példa H—a,y—Dab—Arg—Gly—Phe-Phe—NEI2 előállítása a)Di—Z— a,7—Dab — Arg(N02 )— Gly—Phe— -Phe-NH2 előállítása A 30. példa e) lépésében ismertetett módon 0,80 g Z-Arg(N02)-Gly-Phe-Phe-NH2-t ecetsavas hidrogén-bromid-oldattal kezelünk és 10 ml dimetil-formamidban feloldunk, majd a kapott oldatot trietil-aminnal semlegesítjük. Ugyanekkor 5 ml tetrahidrofuránban feloldunk 0,50 g di-Z—a,7-Dab-OH-t és 0,26 g HONB-t, majd a kapott oldathoz jeges hűtés közben 0,30 g DCC-t adunk. Az oldatot ezután 4 órán át keverjük, majd a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és a szűrlethez hozzáadjuk az előző bekezdésben előállított dimetil-formamidos oldatot. A reakció-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 27
