175306. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új polipeptidek előállítására
21 175306 22 ezután liofilizáljuk, majd a liofilizált anyagot 20 ml vízben feloldjuk. Az így kapott oldatot felvisszük egy 3,0 cm-szer 28 cm méretű, karboximetil-cellulózzal töltött oszlopra, majd az oszlopot 1,5 ml 0,005 mólos vizes ammónium-acetát-oldattal és 1,5 liter 0,2 mólos vizes ammónium-acetát-oldattal gradiens-eluálásnak vetjük alá. Az 1490 ml és 1840 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk. így 980 mg (65,7%) mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [cü]q2 = —59,1° (c = 0,52, vízben). Elemzési eredmények a C41H54O7N10-2C2H4CV4H2O képlet alapján: számított: C =54,53%, H =7,12%, N = 14,13%, talált: C =54,34%, H =6,98%, N =13,98%. Aminosav-elemzés : Arg: 1,00, Pro: 1,11, Tyr: 1,00, Phe: 2,11 ß-Ala: 0,94 (peptidtartalom 75,7%). A példa szerinti vegyület előállítható a c) és d) lépésekben ismertetett módon az alábbi, vázlatosan közölt módszerekkel is. 1. Z-ß—Alá-Arg(N02)-Pro-Phe-OH-t és H—Phe—Tyr—NH2-t a HONB/DCC módszerrel kondenzálunk, majd a kapott Z-ß-Ala-Arg(N02 )-Pro—Phe—Phe—Tyr—NH2 -t palládiumkatalizátor jelenlétében hidrogéngázzal vagy pedig hidrogén-fluoriddal (3-Ala-Arg-Pro—Phe-Phe-Tyr-NH2 -vé, vagyis a példa szerinti vegyületté konvertáljuk. 2. Z—0—Alá—Arg(N02)—Pro—Phe-Phe—OH-t és H~Tyr—NH2-t a HONB/DCC módszerrel kondenzálunk, majd a kapott Z-ß-Ala-Arg(N02)-Pro-Phe—Tyr—NH2 palládiumkatalizátor jelenlétében hidrogéngázzal vagy pedig hidrogén-fluoriddal a példa szerinti vegyületté konvertáljuk. 3. Z—0—Alá - Arg(HCl)—OH-t és H-Pro-Phe-Phe-Tyr—NH2 -t a HONB/DCC módszerrel kondenzálunk, majd a kapott Z—ß—Ala—Arg—Pro-Phe-Phe—Tyr—NH2-t palládiumkatalizátor jelenlétében hidrogéngázzal a példa szerinti vegyületté konvertáljuk. 7. példa H-0-Ala—Arg-Pro—Phe—Phe—NH2 előállítása A 6. példa c) lépésében ismertetett módon járunk el, de Z—Phe-Phe -Tyr—NH2 helyett Z-Phe-Phe-NH2-t használunk, majd a 6. példa d) lépését is elvégezve 1,24 g mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk fehér pelyhes csapadék formájában. Fajlagos forgatóképessége [a]?,2 = -48.6° (c = 0,42,vízben). Aminosav-elemzés : Jrg: 1,08, Pro: 1,00, Phe: 1,98, P~Ala: 0,97 (peptidtartalom 82,6%). 8. példa H—ß—Ala—Arg—ß—Alá—Phe—Phe—Tyr—NH2 előállítása a) Z-ß-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH2 előállítása 40 ml dimetil-formamidban feloldunk 2,0 g Z—Phe—Phe—Tyr—NH2-t, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 5 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezt követően kiszűrjük, majd a szűrlethez 1,39 g Z—ß—Ala—ONB-t adunk. A kapott keveréket 9 órán át keverjük, majd a dimetil-formamidot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékhoz 50 ml vizet adunk és a kivált port kiszűrjük, majd szárítjuk. A terméket ezután dimetil-formamid és etil-acetát elegyéből átcsapjuk. Így 2,02 g (88,0%) mennyiségben a 232°C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk. Fajlagos forgatóképessége [a]p2 = -23,4° (c = 0,94, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C38H4i07Ns*H20 képlet alapján: számított: C =65,41%, H =6,21%, N = 10,04%, talált: C =65,18%, H =6,20%, N = 10,32%. b) Z—Arg(N02 )—ß—Alá—Phe—Phe—Tyr—NH2 előállítása. 30 ml dimetil-formamidban feloldunk 1,0 g Z-ß-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH2-t, majd a kapott oldaton katalizátorként palládiumkormot használva 6 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűrlethez Z-Arg(N02)—ODNP [ezt a vegyületet 0,52 g Z—Arg(N02)—ÖH-ból és 0,30 g 2,4-dinitro-fenolból 10 ml tetrahidrofuránban a DCC módszerrel állítjuk elő] tetrahidrofurános oldatát adjuk. A reakcióelegyet ezután 13 órán át keverjük, majd az oldószert ledesztilláljuk. A maradékhoz 50 ml vizet adunk, majd a kivált port kiszűrjük és szárítjuk. így 1,01 g (74,9%) mennyiségben a 192 -194 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk. Fajlagos forgatóképessége [a]p2 = —11,1° (c=l,02, dimetil* -formamidban). Elemzési eredmények » C44H520i0Ni0-2H20 képlet alapján: számított: C = 57,63%, H =6,16%, N = 15,28%, talált: C = 57,63%, H =5,93%, N = 15,61%. c) Z—ß-Ala—Arg(N02 ) -ß— Ala-Phe—Phe—Tyr—NH2 előállítása. A b) lépésben kapott vegyületből 200 mg-hoz 0,2 ml anizolt, majd 7 ml 25%-os ecetsavas hidrogén-bromid-oldatot adunk. A kapott keveréket szobahőmérsékleten 40 percen át rázzuk, majd 100 ml dietilétert adunk hozzá és a képződött csapadékot 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
