175255. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás az antimikotikus tulajdonságú mikoheptin előállítására, különösen az antibiotikum elkülönítésére
5 175255 6 1. példa A Streptoverticillium mycoheptinicum 44B/1 törzs 5000jug/g aktivitású micéliumából 1 kg-ot 2 súly% kalciumkloridot és 10 súly% metilénkloridot tartalmazó 80%-os vizes izopropanol-oldattal háromszor extrahálunk. Az összes extrahálószer és a micélium egymáshoz való aránya 5 : 1 (térfogatrész-súlyrész). Az extraktumokat egyesítjük, és legfeljebb 60 °C hőmérsékleten, 10—20 torr nyomáson 1,5 liter térfogatra pároljuk be. A koncentrátumot 5 °C-ra hűtjük, és 2 térfogatrész vizet adunk hozzá. A kivált csapadékot leválasztjuk, 50%-os vizes izopropanol-oldattal, majd acetonnal mossuk, és vákuumban szárítjuk. A szárított antibiotikumot 20 térfogatrész dimetilformamid : 1 súlyrész szárított por arányban dimetilformamidban oldjuk, az oldhatatlan szennyeződéseket leválasztjuk, és az antibiotikumot víz hozzáadásával, a víz/dimetilformamid 1 .1 arány beállításával kicsapjuk. A kapott antibiotikumpasztát 0,5 súly% nátriumhexametafoszfátot tartalmazó 40%-os vizes n-propanol-oldattal, majd vízzel és acetonnal mossuk, és vákuumban szárítjuk. 2,33 g végterméket kapunk, amely 750g/mg mikoheptint tartalmaz. A mikoheptin hozama a micélium mikoheptin-tartalmára vonatkoztatva, az aktivitás alapján 35%. 2. példa A Streptoverticillium mycoheptinicum 44B/1 törzs (melynek aktivitása 4860pg/g) micéliumából 1.08 kg-ot 6 liter metilénkloriddal mosunk. A mosott masszából az antibiotikumot 3-szori extrahálással vonjuk ki. Az első extrakcióhoz 2 súly% kalciumkloridot tartalmazó 80%-os vizes izopropanol oldatot, a másodikhoz és a harmadikhoz 10 súly% metilénkloridot és 2 súly% kalciumkloridot tartalmazó 65%-os vizes izopropanol oldatot adunk. Az extraháló szer micélium arány 5 :1 (térf. rész: súlyrész). Az extraktumokat egyesítjük és legfeljebb 60°C-on 10-20 ton maradék nyomáson 1,5 literre bepároljuk. A koncentrátumot 5 °C-ra hű tjük és 2 térf. rész vizet adunk hozzá. A kicsapódott csapadékot leválasztjuk, acetonnal mossuk és 10 torr nyomáson vákuumban szárítjuk. A kapott antibiotikum port mossuk, majd abból 25.8 g-ot, melynek 1 mg-ja 165pg alapanyagot tartalmaz 1 súlyrész porra számítva 50 térfogatrész 50%-os vizes izopropanol oldattal mossuk, majd a pasztát leválasztjuk. Ezt követően a pasztát acetonnal mossuk és vákuumban bepároljuk. 10,19 g 289pg/mg alapanyagot tartalmazó port kapunk. A port 200 ml dimetilformamidban feldoldjuk, az oldhatatlan szennyeződéseket leválasztjuk és az antibiotikumot 1 :1 víz/dimetilformamid arány mellett vízzel kicsapjuk. A csapadékot leválasztjuk, acetonnal mossuk és vákuumban 10 torr nyomáson szárítjuk. 4,22 g port kapunk, amely 572jug/mg alapanyagot tartalmaz. A kapott port 400 ml 0,5 súly% nátriumhexametafoszfátot tartalmazó 40%-os n-propanol oldattal mossuk, majd a kapott pasztát leválasztjuk és 400 ml vízzel, majd acetonnal mossuk és vákuumban 10 torr nyomáson szárítjuk. 2,31 g végterméket kapunk, amely 760ng/mg mikoheptint tartalmaz. A mikoheptin hozama a micélium mikoheptin tartalmára vonatkoztatva, az aktivitás alapján 32,9%. 3. pél^a A Streptoverticillium mycoheptinicum 44 B/l törzs micéliumából 1 kg-ot 8 súly% kalciumkloridot és 15 súly% metilénkloridot tartalmazó 70%-os vizes n-propanol oldattal extrahálunk. Az extrakciót háromszor végezzük el 5 :1 extrahálószer/micélium arány mellett. Az ezt követő műveleteket az 1. példában leírtak szerint végezzük el. 2,3 g végterméket kapunk, amely 740/Jg/mg mikoheptint tartalmaz. A mikoheptin hozam a micéliumban levő mikoheptin tartalmára vonatkoztatva, az aktivitás alapján 30%. 4. példa Az extrakciót, a leválasztást, majd a dimetilformamid oldatból való leválasztást az 1. példában leírtak szerint végezzük, micéliumként a Streptoverticillium mycoheptinicum 440 törzs micéliumát alkalmazva, és az extrakciót 40°C-on végezzük. A micélium aktivitása 5000 nglg. A dimetilformamidból való leválasztás után kapott antibiotikum pasztát 0,5 súly% nátriumhexametafoszfátot tartalmazó 20%-os vizes n-propanol oldattal, majd vízzel és acetonnal mossuk és vákuumban 10 ton maradék nyomáson szárítjuk. 2,3 g végterméket kapunk, amely 740jug/mg mikoheptint tartalmaz. A mikoheptin hozama a micéliumban levő mikoheptin tartalomra vonatkoztatva, az aktivitás alapján 34%. A termék legfeljebb 5% pentaént tartalmaz. 5. példa Az extrakciót, a leválasztást, a dimetilformamidból való leválasztást a 4. példában leírtak szerint végezzük, az extrakciót azonban 50°C-on hajtjuk végre. A dímetilformamidból való leválasztás után kapott antibiotikum pasztát 0,2 súly% nátriumhexametafoszfátot tartalmazó 50%-os vizes n-propanol oldattal, majd vízzel és acetonnal mossuk és ezután 10 torr maradék nyomáson vákuumban szárítjuk. 1,94 g végterméket kapunk, amely 800/ig/mg mikoheptint tartalmaz. A mikoheptin hozama a micéliumban levő mikoheptin tartalomra vonatkoztatva, az aktivitás alapján 31%. A termék legfeljebb 5% pentaént tartalmaz. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
