175208. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens trigliceridek meghatározására
5 175208 6 2. példa A találmány szerinti eljárásnak, illetve reagensnek a 2 229 849 sz. Német Szövetségi Köztársaság-beli szabadalmi leírás szerinti eljárással, illetve reagenssel való összehasonlítása céljából a következő kísérleteket végeztük: 1. és 2. kísérlet: 4,9 ml 0,1 mólos 7,6 pH-jú trietanolamin-puffert, amely 3 mmól magnézium-szulfátot, 1,5 mg/ml RSR-t és 0,1 mg/ml nátrium-dodecil-szulfátot tartalmaz, 0,2 ml 6 mmólos desztillált vizes NADH-, 33 mmólos ADP- és 1 mmólos DEP-oldatot, 0,1 ml 2 mg (ml LDH, 1 mg/ml PK, 0. 2 mg/ml lipáz (Rhizopus arrhizusból), 4,0 mg/ml karboxilészteráz kristályszuszpenziót és 0,1 ml szérumot (körülbelül 500 mg% triglicerid) összekeverünk. Ebből az oldatból 2,5 ml-t az 1. küvettába töltünk, a maradékot pedig a 2. küvettába. 3. és 4. kísérlet: 5 ml-t az 1. példa szerinti 1. komponensből, 0,1 ml-t az 1. példa szerinti 2. komponensből, 0,1 ml-t az 1. példa szerinti 3. komponensből, és 0,1 ml szérumot (mint az 1. és 2. kísérletnél) elegyítünk. A kapott oldatból 2,5 ml-t a 3. küvettába töltünk, a maradékot pedig a 4. küvettába. Körülbelül 20 perc múlva az 1. és 2. küvettába 0. 01.- 0,01 ml GK-szuszpenziót pipettázunk. A 2. és 4. küvetta vakpróba. Eredmények: 1. Eredmény vakpróba figyelembevételével kiértékelve: 1/2 küvetták 517 mg triglicerid/100 ml szérum 3/4 küvetták 508 mg triglicerid/100 ml szérum 10 perc múlva Eredmény vakpróba nélkül kiértékelve: 1. küvetta 477 mg triglicerid/100 ml szérum 3. küvetta 513 mg triglicerid/100 ml szérum 10 perc múlva A találmány szerinti reagenssel gyakorlatúig azonos értékeket mérünk vakpróba figyelembevételével és anélkül is. A 2 229 849 sz. Német Szövetségi Köztársaság-beli szabadalmi leírás szerinti reagenssel (a fellépő zavarosodás miatt) eltérő eredményeket kapunk; a különbség a jelen példában körülbelül 8 %. 2. Zavarosodás. Közvetlenül a minta hozzáadása után mindegyik kísérleti oldat csaknem tiszta. Az 1. és 2. küvettában 5 perc múlva jelentős zavarosodás keletkezik. A 3. és 4. küvetta 1/2 perc elteltével kitisztul. 55 perc múlva a 4. küvettában még mindig tiszta az oldat, a 2. küvettában nagyon zavaros. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás trigliceridek meghatározására lipázzal, különösen Rhizopus arrhizusból nyert lipázzal egy karboxilészteráz és egy 10-15 szénatomos alkil-csoportot tartalmazó alkálifém- vagy alkáli-földfém- alkil-szulfát jelenlétében végzett enzimatikus elszappanosítással, azzal jellemezve, hogy ezenkívül még egy RO(CH2 CH2 0)nH általános képletű vegyületet — ahol R jelentése 14-20 szénatomos alkil- vagy alkenil-csoport, és n jelentése 7-20-ig terjedő szám — adunk a vizsgálandó mintához. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatos!tási módja, azzal jellemezve, hogy olyan RO(CH2 CH2)n H általános képletű vegyületet adunk átvizsgálandó mintához, ahol n jelentése 9-15-ig terjedő szám. 3. A 2. igénypont szennti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan RO(CH2 CH2 0)nH általános képletű vegyületet adunk a vizsgálandó mintához, ahol n jelentése 12. 4. Az 1-3. igénypont bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a puffer térfogatára számítva 0,005-0,2 súly% RO(CH2 CH20)nH általános képletű vegyületet adunk a vizsgálandó mintához, ahol R és n jelentése az 1. igénypont szerinti. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 0,01—0,03 súly%-nyi R0(CH2CH20)n H általános képletű vegyületet adunk a vizsgálandó mintához, ahol R és n jelentése az 1. igénypont szerinti. 6. Reagens az 1-5. igénypont bármelyike szerinti eljárás foganatosítására, amely lipázt, különösen Rhizopus arrhizusból származó lipázt, karboxüészterázt, 10-15 szénatomos alkil-csoporttal rendelkező alkálifém- vagy alkáli-földfém-alkil- szulfátot, puffert és glicerin kimutatására alkalmas rendszert tartalmaz, azzal jellemezve, hogy még egy R0/CH2CH20)nH általános képletű vegyületet — ahol R jelentése 14-20 szénatomos alkil- vagy alkenil-csoport, és n jelentése 7-20-ig terjedő szám - is tartalmaz. 7. A 6. igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy a glicerin kimutatására szolgáló rendszer redukált alakú nikotinamid-adenin-dinukleotidból, adenozin-trifoszfátból, foszfo-enol-piroszőlősavból, tejsavdehidrogénázból, piroszőlősav-kinázból, glicerin-kinázból, magnáziumionokat tartalmazó oldatból és pufferből áll. 8. A 6. és 7. igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy a rendszer szérumalbumint is tartalmaz. 9. A 7. és 8. igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy a reagens 0,1-10 mg/ml lipázból (Rhizopus arrhizusból), 0,01-20,0 mg/ml karboxilészterázból (mikroorganizmusokból), 0,01-0,2 mg/ml nátrium-dodecü-szulfátból, 0,015-0,3 mg/ml cetil-sztearil-poliglikol-éterből (12 mól etilén-oxiddal), 1- 20 mmól redukált alakú nikotinamid-adenindinukleotidból, 10-100 mmól adenozin-trifoszfátból, 2- 20 mmól foszfo-enol-piroszőlősavból, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
