175202. lajstromszámú szabadalom • Eljárás diszulfidkötéses gyűrűt tartalmazó peptidek előállítására
175202 tein-csoportot pedig a 3-as helyzetben tartalmazó peptidből indulunk. ki. Szomatosztatin előállítása eseten a peptidet előnyösen klórmetilezett polisztirol-gyantán alakítjuk ki, kalcitoninokat célszerűen benzhidrilamin—polis ztirol—gyantán építjük szerinti gyürüzárási lépésben kiindulási anyagként felhasználható nem-gyürüs peptidek két cisztein-csoportot tartalmasnak. Zzek a peptidek a vedócsoportok lehasitá— sa előtt a -CYS-/A/X -CYS- részképlettel jellemezhet ők; a vé- SB BZ / f* dőcsoportok savas lehasitása után pedig a -•CYB-/A.' —CYC-részkepletnek felelnek meg /a képletekben A amii..jSoV—csoportot, CYS cisztein-csoportot, R n-alkil-csoportot és BZ benzil-csoportot vagy szubsztitualt benzil-csoportot jelent, mir. x ertéeg ísz szám/. Ennek me gfeielően a vedocsoporke 0 vagy pozitiv w . tok savas lehasitása után kapott peptid egyik cisztein-csoport— ja szabad szulf-hidril-csoportot hordoz, a másik cisztein—csoport szülihidril-csoportja pedig egy n-alkiltio-csoporttal képezett diszulfid-kötes formájában van jelen. A találmány szerinti gyürüzárási reakcióban kiindulási anyagként minden olyan peptid felhasználható, amely megfelel a fenti szerkezetnek, azaz amely egy szabad cisztein-csoportot és egy n-alkiltio-védőcsoportot hordozó cisztein-csoportot tartalmaz. Ezek a peptidek oldataikban, körülbelül 5 és 10 közötti pH-értéken spontán átrendeződést szenvednek, amelynek eredményeként diszulfid-kötést tartalmazó gyűrűs peptidek képződnek és n-alkilmerkaptánok szabadulnak fel. Oldószerként bármilyen anyagot felhasználhatunk, amelyben az adott peptid oldható, előnyösen azonban az átrendeződést vizes vagy vizes-alkoholos vagy alkoholos oldatban hajtjuk végre. Az átrendeződési reakció megkönnyítése érdekében az oldat pH-ját ammóniumhidroxid vagy alkálifémhidroxidok beadagolásával 5,0 és 8,5 közötti, előnyösen 6,0 és 8,5 közötti, célszerűen 7*5 körüli értékre állítjuk be. 6,0-nál kisebb píl-értéken az átrendeződés viszonylag lassan megy végbe. Az átrendeződés 8,5-nél nagyobb /például 10 és 10.5 közötti/ pH-értéken is lezajlik, ekkor azonban hozamcsökkenés veszélye allhat fenn. Előnyösen járunk el, ha az oldatot az átrendeződés lezajlása alatt keverjük. Az átrendeződés általában 2-48 órát vehet igénybe, rendszerint azonban körülbelül 24 órán belül lezajlik. A keverés elősegíti a reakció lezajlását. Ügyelnünk kell arra, hogy a reakciót oxigénmentes oldószerben, oxigén és oxigénfejlesztő anyagok kizárásval hajtsuk végre. Ezt előnyösen úgy biztosithatjuk, hogy a peptid oldatán közömbös gázt vezetünk át. A reakció során felszabaduló n-alkilmerkaptán a bevezetett közömbös gázzal /például nitrogénnel/ űzhető ki a rendszerből. A reakciót általában akkor tekinthetjük lezajlottnak, ha a rendszerből távozó közömbös gáz már nem tartalmaz tánt. A spontán intramolekuláris átrendeződés révén a merkap-CYS—/A/X-CYS- részképletü peptidekből /ahol az egyik CYS részhez -SE csoport kapcsolódik/ -ÖYB-/A/ -ÔYS- részképletü, ditîSÎÎoth2îeaS?c!S7Üîiittîfc^Jtal^aziô PöPtidek alakulnak ki. E részképletekben —CYS—, A, B es x jelentess a fenti. wAi^m?ní^£ke5,a*®altpiót a fent ismertetett biztonsági rendszabályok betartásával hajtjuk végre, a peptid—molekula az int— 10
