175202. lajstromszámú szabadalom • Eljárás diszulfidkötéses gyűrűt tartalmazó peptidek előállítására

175202

edényt szárazjég/aceton fürdőbe merítjük, és az edénybe 15 ml liidr ogénf luor id-gázt kondenzáltat un k. A reakcióelegyet 1 órán át jégfürdőn, 0 C°-on keverjük, majda hidrogén!luoridőt csökkentett nyomáson lepároljuk. A maradékot szór 25 nil etilacetáttal eldörzsöljük, majd a gyantaszemcsékről 2-szer 50 ml jégecettel leoldjuk a peptidet. Az extraktumot liofilizáljuk. 1063 mg peptidet kapunk.

Gyürüzáras /emberi kalcitonin előállítása/:

1000 mg, a fenti módon előállított nyers peptidet 250 ml oxigénmentes, desztillált viz és 1 ml jégecet elegy ében oldunk, és az oldat pE-ját tömény ammóniumhidroxid—oldattal 7,5-xe állítjuk. Az elegyet zárt edényben, nitrogén-bevezetés közben 24 órán át keverjük. 24 óra elteltével az edényből távozó nitrog énáramban etilmer kaptán már nem mutatható ki. A távozó nitrogéngáz etilmerkaptán-tartalmát úgy mutatjuk ki, hogy a gázáramot Ellman-reágenst tartalmazó oldaton £Arcli.üiochem. Biophys. 32, 70-77 /1359/7 bocsátjuk át. Ezután a reakcióelegyet jágecettel pE = 3,2 értékre savanyítjuk, majd liofilizáljuk.

A nyers emberi kalcitonin tisztítása:

A fenti lépésben kapott, 985 mg súlyú szilárd anyagot 0,5 n vizes ecetsav-oldatban oldjuk, és az oldatot íinomszemcsés Sephadex G—25 géllel töltött oszlopon bocsátjuk át. Az oszlopot 0,5 n vizes ecetsav-oldattal eluáljuk. Az emberi kalcitonint tartalmazó eluátumfrairciókat egyesitjük és liof ilizáljuk.

A kapott fehér, pelyhes, szilárd anyagot 0,05 mólos vizes ammóniumaceuát-oldatban /pH = 5/ oldjuk. Az oldat pli-ját 5-re állítjuk vissza, majd az oldatot AP-üephadex 0-25*géllel töltött oszlopon ioncserés kromatográfi árnak vetjük alá.~Lluálószerként ammóniumacetát-pufíeroldatot használunk fel. Az emberi kalcitonint tartalmazó eluátumfrakciókat egyesitjük, majd kétszer fagyasztva szárítjuk. Fehér, pelyhes, szilárd anyagot

kapunk, amely kémiaiig szakirodalomban £Helv. emberi kalcitoninnal. A

egyaránt

megegyezik

es biológiailag

Chim. Acta 2135 /1970/7 ismertetett termék savas hidrolízissel meghatározott aminosav-elemzési adatai tettük a számított értékeket:

ASP: 3,28 /3/; THH: 5,21 /5/;

GLY: 4,33 /4/; ALA: 2,03 /2/;

ILE: 1,07 /l/; LEU: 2,24 /2/; termék PRO- és CYS-tartalmát lógiai aktivitása 100 MPC-egys ég/mg-nak f

a következők /zárójelben feltün- LYS: 1,02 /1/i IIIA : 0,99 /l/í SEP: 0,74 /l/; GLU: 1,95 /2/; VAL: 1,04 /l/; LETT: 0,86 /l/; TYR: 0,7 /l/í FHE: 3,0 /3/; A nem határoztuk meg. A termék bio- - lel. meg.

A találmány szerinti eljárás igen előnyösen alkalmazható a vazopresszin-szintézisben is. A vazopresszin-szintézis során a peptid—láncot a 6. táblázatban felsorolt reagensekből építjük fel. A kapott, gyantához kötött peptid a

CÆ T S-P BZ BZ

la 5 I I ! !

&- CH-ITH—GLY - A P G-PP 0-CYS -A3 ií- GLN-PÉP -TÉR-CY5 -H képletnek felel meg, ahol Q?,R és BZ jelentése azonos a korábban közöltekkel. A savas hasitás után

S-R

I

H-CY3 -ÏHR-PHS-GLE—A 3 H-CYS-PR O-A RG-GLY -HE?

képletü peptidet kapunk, amelyből a találmány szerinti gyürüzárási módszerrel a

20