175151. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenilglicint tartalmazó, gasztrin hatású peptidek előállítására
25 175151 26 4. lépés N-a-terc-Butil-oxi-karbonil-Njnd-formil-L-triptofil-L-2-amino-dekanoil-L-aszparagil-D-fenil-glicin-amicl 5 0,90 g (1,90 mmól) H-L-Ade-Asp-D-Phg-NH2 • HCl-ot és 0,94 g BOC-Trp(For)-OPFP-t 0,53 ml (3,8 mmól) trietilamin jelenlétében 15 ml DMF-ban reagáltatunk. Másnap a reakcióelegyet vá- 10 kuumban bepároljuk, a szilárd maradékot vízzel szűrjük, majd az anyagot vízzel és éterrel mossuk, így 1,26 g (92,0%) BOC-Trp(For)-L-Ade-Asp—D—Phg—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 210 °C (bomlik), Rf5 = 0,45, [a]D = -50,5° (c = 1,0, dimetil- 15 formamidban). Elemzési eredmények a C39HS209N6 összegképlet (molekulasúly: 748,89) alapján: számított: C =62,55%, H =7,00%, 20 N = 11,22%, talált: C =62,52%, H =6,81%, N = 11,38%. 5. lépés 25 L-triptofil-L-2-amino-dekanoil-L-aszparagil--D-fenil-glicin-amid-hidroklorid 1,5 g (1,53 mmól) BOC—Trp(For)-L-Ade- 30 —Asp—D—Phg—NH2-ot 0,53 ml (7,5 mmól) merkapto-etanol jelenlétében 10 ml 4n sósavas dioxánnal kezelünk. 15 perc múlva a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot éterrel szűrjük, így 0,98 g (98%) H—Trp-L—Ade-Asp-D-Phg- 35 —NH2 • HCl-ot kapunk, olvadáspont: 225 °C (bomlik), Rf = 0,45, [a]D = -47,6°, (c = 1,0, dimetilformamidban). 6. lépés terc-Butil-oxi-karbonil-amino-oxi-acetil-L-triptofîl-L-2-amino-dekanoil-L--aszparagil-D-fenil-glicin-amid 45 0,85 g (1,24 mmól) H—Trp—L—Ade—Asp—D—Phg—NH2-ot és 0,55 g (1,24 mmól) BOC—OGLy-OPCP-t (1. példa, 9. lépés) 0,52 ml (3,72 mmól) trietilamin jelenlétében 10 ml DMF-ban reagáltatunk. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepárol- 50 juk, a maradékot vízzel szűrjük, a csapadékot vízzel és éterrel mossuk. A 0,82 g súlyú nyersterméket a 10. futtatóeleggyel a szokásos módon szilikagél oszlopon kromatografáljuk. így 0,42 g BOC-OGly-Trp—L-Ade-Asp-D-Phg-NH2-ot ka- 55 punk, olvadáspont: 193—194 °C (bomlik), Rf5 = 0,35, R}° = 0,25, [a]D = -35,9° (c = 1,0, dimetilformamidban). Elemzési eredmények a C40H55OioN7 összegképlet (molekulasúly: 793,99) alapján: 60 számított: C =60,51%, H =6,98%, N =12,35%, talált: C =60,54%, H =6,87%, N= 12,16%. 65 1. lépés D-2-(terc-Butil-oxi-karbonil-amino)-dekánsav-pentafluor-fenil-észter Teljesen azonos módon készítjük el, mint az L-izomert a 11. példa, 1. lépése szerint. Kitermelés: 75,0%, olvadáspont: 45-46,5 °C, =0,85, [a]D =+18,1° (c = 1,0, dioxánban). 2. lépés D-2-(terc-Butil-oxi-karbonil-amino-dekanoil-L-aszparagjl-0-(terc-butil-észter)-D-fenil-glicin-amid 1,20 g (3,72 mmól) H-Asp(0*Bu)-D-Phg—NH2-ot (9. példa, 2. lépés) és 1,82 g (4,0 mmól) BOC-D-Ade-OPFP-t 0,56 ml (4,0 mmól) trietilamin jelenlétében 10 ml DMF-ban reagáltatunk. 30 perc után a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a szilárd maradékot éterrel szűrjük. Így 1,95 g (88,8%) BOC—D—Ade—Asp(0*Bu)—D—Phg—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 156—157 °C, Rf =0,85, [a]D = -47,5°, (c = 1,0, dimetilformamidban). Elemzési eredmények a C31H50O7N4 összegképlet (molekulasúly: 590,74) alapján: számított: C = 63,02%, H = 8,53%, N =9,49%, talált: C =63,14%, H =8,60%, N = 9,56%. 3. lépés D-2-Amino-dekanoil-L-aszparagil-D-fenil--glicin-amid-hidroklorid 1,83 g (3,08 mmól) BOC—D—Ade—Asp—(0*Bu)—D-Phg—NH2 -ot 11 ml 4 n sósavas ecetsavval kezelünk. 1 óra múlva a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk. A maradékot éterrel szűrjük. így 1,45 g (99,0%) H-D-Ade-Asp-D-Phg-NH2 • HCl-ot kapunk, olvadáspont: 150—153 °C. Rf=0,40, [«]„ = -82,4° (c = 1,0, dimetilformamidban). 4. lépés N-terc-Butil-oxi-karbonil-L-triptofil-2-D--amino-dekanoil-L-aszparagil-D-fenil-glicin-amid 1,40 g (2,97 mmól) H—D—Ade-L-Asp - D-Phg-NH2 HCl-ot és 1,44 g (3,05 mmól) BOC—Trp—OPFP-t 1,26 ml (9,0 mmól) trietilamin jelenlétében 15 ml DMF-ban reagáltatunk. Másnap a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, az olajszerű maradékot éterrel hidegen megszilárdítjuk, majd a szuszpenziót szűrjük, a csapadékot éterrel, kevés ecetsavat tartalmazó vízzel és vízzel mossuk. így 1,72 g (80,4%) BOC-Trp-D-Ade-L-Asp-D-Phg—NH2-ot kapunk, olvadáspont: 170 °C (bomlik) R| =0,50, [o]D = — 61,1° (c=l,0, dimetilformamidban). 12. példa 13
