175050. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás neomycin előállítására
9 175050 10 más alkalmazásával 60 m3 /óra levegő átáramoltatás mellett 32 °C-on, 2,2 kVV/m3 bekevert energia alkalmazásával 25 órán át fermentáltuk. Az inokulum fermentációból az előfermentációs táptalaj térfogatára számolt 10%-nyi mennyiséget oltottunk át az előfermentációs táptalajba, melynek összetétele a következő volt: Szójaliszt 2,5% Burgonyakeményítő 4,0% (CaC03) Kalciumkarbonát 0,5% (NaCl) Nátriumklorid 0,5% Burgonyacukor 2,5% Pálmaolaj 0,5% pH sterilizálás előtt: 6,65 Sterilizálás: 125°C-on, 90 percig. pH sterilizálás után: 6,00—7,20. Az előfermentálást 60 m3 /óra levegőztetés alkalmazása mellett a fermentáció első 10 órájában 1 atm, ezután 0,4 atm belső nyomás tartása mellett, 32 °C hőmérséklet tartásával, 2,6 kW/m3 bekevert energia alkalmazása mellett 20 órán át végeztük. A fermentációs táptalaj összetétele a következő volt: Szójaliszt 5,0% Keményítő (kukorica finomítvány formájában) 6,0% (CaC03) Kalciumkarbonát 0,25% Burgonyacukor 1,5% (NaCl) Nátriumklorid 0,5% Szójaolaj 0,5% pH sterilizálás előtt: 6,52 Sterilizálás: 120°C-on, 70 percig. pH sterilizálás után: 6,40—7,00. A 32 °C-ra hűtött tápfolyadékot a tápfolyadék mennyiségére számolt 10% inokulum fermentációval oltottuk be, 60 m3 /óra levegőztetéssel, a pH = 6,90 érték eléréséig 1 atm, majd 0,4 atm belső nyomás tartásával, a fermentáció első 40 órájában 32 °C-on, majd 34 °C-on végig, 2,6 kW/m3 bekevert energia alkalmazása mellett 136 órán át végeztük. A fermentáció 136. órájában hatóanyagtartalma 18 700 gamma/ml volt. A fermentlé szűrletéből (Varion KCO típusú ioncserélő gyanta alkalmazásával) a 169 452 számú magyar szabadalom szerinti eljárással 1 m3-re vonatkoztatva 9050 g tiszta neomycin-szulfát hatóanyagot nyertünk ki. Szabadalmi igénypontok: 1. Új eljárás neomycin előállítására 120—150 órás aerob fermentációval, 2-3 kW/m3 bekevert 5 energia felhasználásával, a tenyésztést 0—40 órás korig 32 °C, 40 órás kortól 34 °C hőmérsékleten és 0,4—1,0 atm belső nyomáson való tartásával, azzal jellemezve, hogy a 00165 számon letétbe helyezett, LN—47 jelű Streptomyces fradiae törzs tenyésztését 10 három fázisban végezzük, — az első fázisban az inokulum táptalaj 0,25-0,32% könnyen metabolizálható organikus nitrogént, 0,1—0,15% anorganikus nitrogént, 2,2—2,8% nehezen metabolizálható szénhidrátot és szervetlen sókat, a második fázis- 15 ban a közti fermentációs táptalaj 0,18-0,22% nehezen metabolizálható organikus nitrogént, 3,8- —4,2% nehezen metabolizálható szénhidrátot, 1,8- —2,2% könnyen metabolizálható szénhidrátot és szervetlen sókat, a harmadik fázisban a főfermentá- 20 ciós táptalaj 0,38—0,45% nehezen metabolizálható nitrogént, 5,8-7,0% nehezen metabolizálható szénhidrátot és 0,8—1,2% könnyen metabolizálható szénhidrátot, valamint szervetlen sókat tartalmaz majd az így előállított fermentlé szűrletéből a 25 neomycint ismert módon kinyerjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az első fázisban a táptalajként 0,25—0,32% könnyen metabolizálható nitrogént kukoricalekvár, 0,1-0,15% anorganikus 30 nitrogént ammóniumszulfát. 2,2-2,8% nehezen metabolizálható szénhidrátot burgonyakeményítő formájában alkalmazunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a 2. fázisban a táp-35 talajként 0,18—0,22% nehezen metabolizálható organikus nitrogént szójaliszt, 3,8-4,2% nehezen metabolizálható szénhidrátot burgonyakeményítő, 1,8—2,2% könnyen metabolizálható szénhidrátot burgonyacukor formájában alkalmazunk. 4G 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a 3. fázisban a táptalajként 0,38—0,45% nehezen metabolizálható nitrogént szójaliszt, 5,8-7,0% nehezen metabolizál-45 ható szénhidrátot kukorica finomliszt, 0,8-1,2% könnyen metabolizálható szénhidrátot burgonyacukor formájában alkalmazunk. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás foganatosítási 50 módja, azzal jellemezve, hogy a 3. fázis táptalajában 6,6-8,2% összes szénhidrátot alkalmazunk, melyben a keményítőféleségek aránya a glükózhoz 7,25-5,8 :1. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 804676 - Zrínyi Nyomda, Budapest 5
