175050. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás neomycin előállítására
5 175050 6 Szacharóz 3,0% (NaN03) Nátriumnitrát 0,2% (KH2 PO4) Káliumdihidrogénfoszfát 0,1% (MgS04) Magnéziumszulfát 7H20 0,05% (FeS04) Vas(II)-szulfát 7H20 0,001% (KC1) Káliumklorid 0,05% agar-agar 3,0% pH sterilizálás előtt: 7,00 Sterilizálás: 120°C-on, 30 percig. pH sterilizálás után: 6,80. A fermentáció valamennyi fázisát 1,7 m3-es szénacél készülékben állítottuk elő. A fermentlé térfogata 1 m3 volt, valamennyi példa esetében. Az inokulum fermentációs táptalaj a következe volt: Burgonyakeményítő 2,5% Kukoricalekvár (50%-os) 5,0% [(NIUIíSO«] Ammóniumszulfát 0,5% (CaC03) Kalciumkarbonát 0,8% (NaCl) Nátriurnklorid 0,5% (KH2PO4) Káliumdihidrogénfoszfát 0,03—0,04% pálmaolaj 0,5% pH sterilizálás előtt: 7,00—7,20 Sterilizálás: 125 °C-on, 90 percig. pH sterilizálás után: 6,80—7,20 A 32 °C-ra hűtött tápfolyadékot 5,3 xlO8 számú spórával oltottuk be, majd 0,4 atm belső nyomás alkalmazásával 60 m3 /óra levegő átáramoltatás mellett, 32 °C-on, 2,2 kW/m3 bekevert energia alkalmazásával 25 órán át fermentáltuk. 2. példa A 6/11 jelzésű törzsből 200 cm2 felületű szilárd táptalajon spóraszuszpenziót állítottunk elő oly 5 módon, hogy a beoltott táptalajt 28 °C-on, 168 órán át inkubáltuk. A táptalaj összetétele a következő volt: 10 Szacharóz 3,0% (NaN03) Nátriummtrát 0,2% (KH2 PO4 ) Káliumdihidrogénfoszfát 0,1% (MgSCU) Magnéziumszulfát 7H20 0,05% (FeS04) Vas(II)-szultat 7H20 0,001% 15 (KC1) Káliumklorid 0,05% agar-agar 3,0% pH sterilizálás előtt: 7,00 Sterilizálás: 120°C-on, 30 percig. pH sterilizálás után: 6,80. 20 Az inokulum fermentációs táptalaj összetétele a következő volt: 25 Burgonyakeményítő 2,5% Kukoricalekvár (50%-os) 5,0% [(NH4)2S04] Ammóniumszulfát 0,5% (CaC03) Kalciumkarbonát 0,8% (NaCl) Nátriurnklorid 0,5% 30 (KH2P04) Káliumdihidrogénfoszfát 0,03-0,04% Pálmaolaj 0,5% pH sterilizálás előtt: 7,00—7,20 Sterilizálás: 125°C-on, 90 percig. pH sterilizálás után: 6,80—7,20. A fermentációs táptalaj összetétele a következő volt: Szójaliszt 5,0% Keményítő (kukorica fino-40 mítvány formájában) 4,0% (CaC03) Kalciumkarbonát 0,25% Burgonyacukor 2,77% (NaCl) Nátriurnklorid 0,5% Szójaolaj pH sterilizálás előtt: 6,40 Sterilizálás: 120°C-on, 70 percig. pH sterilizálás után: 6,00-7,20. 0,5% 45 A 32 °C-ra hűtött tápfolyadékot a tápfolyadék 50 mennyiségére számolt 10% inokulum fermentációval oltottuk be, 60 m3/óra levegőztetéssel, pH = 6,90 eléréséig 1 atm, majd 0,4 atm belső nyomás tartásával, a fermentáció első 40 órájában 32 °C-on, majd 34 °C-on végig. 2,6 kW/m3 bekevert 55 energia alkalmazása mellett 136 órán át végeztük. A 32 °C-ra hűtött tápfolyadékot 5,2 x 108 számú spórával oltottuk be, majd 0,4 atm belső nyomás alkalmazásával 60 m3/óra levegő átáramoltatás mellett 32 °C-on, 2,2 kW/m3 bekevert energia alkalmazásával 25 órán át fermentáltuk. Az inokulum fermentációból az előfermentációs táptalaj térfogatára számolt 10%-nyi mennyiséget oltottunk át az előfermentációs táptalajba, melynek összetétele a következő volt: Szójaliszt 2,5% Burgonyakeményítő 4,0% (CaC03) Kalciumkarbonát 0,5% (NaCl) Nátriurnklorid 0,5% Burgonyacukor 2,5% Pálmaolaj 0,5% pH sterilizálás előtt: 6,65 Sterilizálás: 125°C-on, 90 percig. pH sterilizálás után: 6,00-7.20. A fermentáció 136. órájában hatóanyagtartalma 5350 gamma/ml volt. A fermentlé szűrletéből (Varion KCO típusú ioncserélő gyanta alkalmazásával) a 169 452 számú magyar szabadalom szerinti eljárással 1 m3-re vonatkoztatva 3110 g tiszta neomycin-szulfát hatóanyagot nyertünk ki. Az előfermentálást 60 m3 /óra levegőztetés alkalmazása mellett a fermentáció első 10 órájában 1 atm, ezután 0,4 atm belső nyomás tartása mel- 60 lett, 32 °C hőmérséklet tartásával, 2,6 kW/m3 bekevert energia alkalmazása mellett 20 órán át végeztük. A fermentációs táptalaj összetétele a következe 65 volt: 3
