175033. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és eszköz humán korion gonadotropin fokozott termelésével járó rákos megbetegedések kimutatására, valamint terhesség meghatározására
15 175033 16 be vesszük azt a tényt, hogy 500 mill! nemzetközi egység]ml vizelet alatti HCG-koncentrációkat a jelenleg széles körben elterjedt terhességi vizsgálókészletekkel nem lehet kimutatni [lásd Driscoll, S. G. és munkatársai: Am. J. Obstet. Gynecol-, 110, 1083 (1971); Edelmann, D. A. és munkatársai: Am. J. Obstet., Gynecol., 119, 521 (1974), Hepp, H. és Richter, R. H.: Med. Klin., 68, 920 (1973); Taymor, M. L.: Medical world News, 1974. február 1-i szám, 24. oldal; és Medical Letter, 17, 6 (1975)]. Miként korábban már említettük, ha a kereskedelmi forgalomban levő vizsgálókészleteket úgy módosítjuk, hogy kisebb HCG-koncentrációk kimutatására alkalmasak legyenek, akkor nő a téves pozitív eredmény előfordulási valószínűsége. Tekintettel arra, hogy a terhesség első hetében a vizeletben a HCG koncentrációja mintegy 40 milli nemzetközi egység/ml [lásd: Wide, L.: Lancet, 2, 863 (1969)], a találmány szerinti módszer lehetővé teszi a terhesség pontos meghatározását a terhesség első hetében. A találmány szerinti eljárásnak a jelenleg használt in vitro terhességmeghatározási módszerekhez képest (különösen korai terhességmeghatározás esetében) jelentkező megnövelt megbízhatóságát olyan összehasonlító jellegű kísérletsorozattal demonstráljuk, ahol egymást követő napokon vett vizeletmintákat vizsgálunk. így például az alábbi II. táblázatban foglaljuk össze olyan kísérletsorozat eredményeit, amelynek esetében egymást követő napokon olyan egyénektől vettünk vizeletmintát és vizsgáltuk e vizeletmintákat, akik terhességének tényét később orvos klinikailag megerősítette. Az egyes napokon vett vizeletminták mindegyikét ezután megvizsgáltuk a gyakorlatban eddig elteijedten alkalmazott egyik heamagglutinációs-inhibíciós teszttel (röviden: HIT), továbbá egy acetonos kicsapási művelet útján végzett vizeletkoncentrálást követő heamagglutinációs-inhibíciós teszttel (röviden: AE-HIT) és végül a találmány értelmében először ultraszűrés útján végzett koncentrálással, 5 majd haemagglutinációs-inhibíciós teszttel (röviden: UF—HIT). Az UF—HIT módszer esetében a találmány szerinti eljárásnak azt a - korábban már ismertetett változatát - használtuk, amikor a koncentrátort a koncentrálás előtt 1%-os BSA-előmosásnak vetjük alá. 10 A HIT végrehajtásához a korábban már említett Pregnosticon All-in márkanevű vizsgálókészletet használtuk. Reggeli első vizelésből vett 0,1 ml térfogatú mintát Whatman 1. szűrőpapíron át szűrtünk, majd desztillált vízzel 0,4 ml térfogatra hígítottuk és a 15 kapott vizes oldatot az immunológiai tesztreakciónak vetettük alá mintegy 2 órán át. Az AE—HIT végrehajtásához egy ismert acetonos kicsapási módszert [Wide, L. és Gemzell, C.: Acta 20 Endocrinol., 39, 539 (1962)] alkalmaztunk. Közelebbről, reggeli első vizelésből vett 50 ml térfogatú minta pH-ját 1%-os ecetsavoldattal 5,0 értékre beállítottuk, majd Whatman 1. szűrőpapíron át szűrtük és hozzáadtuk 100 ml hideg acetonhoz. A kapott ele- 25 gyet 4 °C és 10 °C között tartottuk 1 órán át, majd 20—25 °C hőmérsékleten 4000 fordulat/perc sebességgel 10 percen át centrifuráltuk. A felülúszó fázist elöntöttük, a csapadékot pedig levegőáramban 10 percen át, majd vákuumexszikkátorban 10 percen át szá- 3o rítottuk. A száraz csapadékot ezután feloldottuk 1,25 ml desztillált vízben, majd az előzőekben ismertetett körülmények között 5 percen át centrifugáltuk. Az így kapott felülúszó folyadékfázisból egy 0,5 ml-es aliquot részt (ami megfelel 20 ml eredeti vizeletnek) 35 használtunk ezután a HIT végrehajtásához. Terhes személy vizsgálati száma1 65 66 98 II. táblázat A menzesz várható napja (0) előtt (-) vagy után (+) vizsgált vizeletminták Eredmények pozitív negatív bizonytalan (♦) (-) (±) HIT AE-HIT UF—HIT +1-4-2 — 4 4 +3 — i 4 +4 — 4 +5 — 4 +6 ± ± 4 0 — ♦ +1 _ 4 4 *2 — ± 4 *3 — ± 4 *4 — ± 4 ♦5 4 4 4 +6 + 4-3 — J i —-2 — 4-1 — 4 0 — nem 4 ♦1 — vizsgál) 4 *2 — 4 *3 — 4 £
