174894. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kinetikus szubsztrátmeghatározásra és reagens ennek kivitelezéséhez
13 174894 14 1. reagens: 0,6mól/liter ammóniumfoszfát-puffer, pH = 7,0, 1,7 mól/liter metanol, 700 E/ml kataláz, 2. reagens: 420 mmól/liter acetilaceton, 2,5 mól/liter metanol, 2,1% hidroxi-polietoxi-dodekán, 3. reagens: íí 7 E/ml koleszterin-észteráz, 4. reagens: 2 4 E/ml koleszterin-oxidáz, 5. reagens: 0,57 mól/liter ammóniumfoszfát-puffer, pH = 7,0, 1.7 mól/liter metanol, 20 mmól/liter acetil-aceton, 0,1% hidroxi-polietoxi-dodekán, 2 660 E/ml kataláz, 2 73 mE/ml koleszterin-észteráz, 6. reagens: 0,57 mól/liter ammóniumfoszfát-puffer, pH = 7,0, 1.7 mól/liter metanol, 20 mmól/liter acetilaceton, 0,1% hidroxi-polietoxi-dodekán, = 650 E/ml kataláz, s 73 mE/ml koleszterin-észteráz, s 74 mE/ml koleszterin-oxidáz, valamint 0,9%-os nátriumklorid-oldatot használunk. 70 meghatározáshoz 80 ml 1. jelű oldatot összekeverünk 4 ml 2. jelű oldattal, használat előtt az oldatot egyszer egy óra hosszat 20-25 °C hőmérsékleten kell temperálni. Az elemzőkészülék beállítása: GEMSAEC ROTOLOADER SAMPLEGEMSAEC CONTROL a reakciójelleg: az üzemelés módja: 5 az első leolvasás (IR): a leolvasás intervalluma (Rí): a leolvasások száma (NR): RATE AUTO 70 másodperc 60 másodperc 6 GEMSAEC COMPUTER 10 A számítógépbe betáplált adatok: IR Rí 15 NR SC KT TF TC 20 AD CD Hl LO SA 25 RM XX 70 60 6 200 (illetve 5,17 mmól/liter) (nem alkalmazzuk) 95 5,5 4 0 220 (illetve 5,7 mmól/liter) 140 (illetve 3,6 mmól/liter) 1,2 2 0 Hígítási határ: 30 500 mg/100 ml, illetve 12,93 mmól/liter. Nagyobb koncentráció esetén 500pl mintát összekeverünk 500 m1 0,9%-os nátriumklorid-oldattal és a vizsgálatot megismételjük. A kapott eredményt kettővel szorozzuk. 35 Magasabbnak tekinthető a 260 mg/100 ml, illetve a 6,7 mmól/liter koleszterin-érték. A kalibrálást a Boehringer Mannheim GmbH Precimat Cholesterin néven kereskedelmi forgalomba hozott termékével, az ellenőrzést ugyancsak 40 a Boehringer Mannheim Precinorm U, Precilip stb. elnevezéssel forgalomba hozott termékével végezhetjük. kapcsoló: B blank-Reagent kapcsoló: minta-vakérték minta (BLANK) (DETERMINATION) a minta térfogata: a minta: 5 Ml 5 Ml (25%)+ nátriumkloridoldat: 50 m1 50 Ml (25%)+ a reagens térfogata: 600 m1 _ reakciókeverék: -600 Ml (60%)+ + 20, 200 és 1000 /rl-es szivattyúkhoz. GEMSAEC ANALYZER hőmérséklet: 25 °C előszűrő: 385-430 nm hullámhossz: 412 nm 45 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás enzimszubsztrátumok kinetikus meghatározására kapcsolt reakciók segítségével, azzal jellemezve, hogy a reakcióparaméterek megválasz-50 tásával a reakciólánc legspecifikusabb részreakcióját az egész reakcióláncra sebességmeghatározóvá és a sebességmeghatározó részreakciót elsőrendűvé vagy pszeudo-elsőrendűvé szabályozzuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatositási 55 módja, azzal jellemezve, hogy a kinetikus meghatározást egy előre megadott időintervallumban végbemenő változás mérésével végezzük. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy a legspecifikusabb 60 részreakciót a másik részreakció, illetve a többi részreakciók enzimjének vagy enzimjeinek túladagolásával sebességmeghatározóvá szabályozzuk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy a legspecifikusabb 65 részreakciót az alkalmazott enzimfajta - Michaelis 7
