174887. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gonococcus szálak előállítására
33 174887 34 A fentieknek megfelelően 7x7 szérumos agglutinációs vizsgálatot végeztünk, hét különböző törzstől származó szálak és szérumok alkalmazásával Pittsburgh 3-2 (ATCC 31149), Pittsburgh 4-2 (ATCC 31151), CDC M-2 (ATCC 31148), CDC 5 T—2 (ATCC 31150), CDC 339-2 (ATCC 31206), CDC C—2 (ATCC 31207) és Norfolk 2-2 (ATCC 31208). Az eredményeket a III. táblázatban mutatjuk be. Az eredmények könnyebb értelmezése érdekében 100-nak vettük minden esetben az eredményt, ha ugyanannak a törzsnek a szálait és szérumát reagáltattuk egymással. A többi eredményt ennek megfelelően átszámítottuk. III. táblázat Szérumnak megfelelő törzs Szálaknak megfelelő törzs Pittsburgh 3 2 Pittsburgh 4-2 CDC M-2 CDC T-2 CDC 339-2 CDC C-2 Norfolk 2-2 Pittsburgh 3-2 100 3,1 8,3 0,17 1,6 <0,008 0,52 Pittsburgh 4—2 0,16 100 <4,2 0,086 0,20 <0,008 0,065 CDC M-2 <0,039 <0,024 100 <0,02 0,20 0,13 0,016 CDC T-2 <0,31 <0,024 <4,2 100 0,20 < 0,008 0,032 CDC 339 2 2,5 <0,024 4,2 <0,02 100 0,016 0,260 CDC C-2 <0,0039 <0,78 <4,2 0,17 <0,10 100 0,065 Norfolk 2-2 <0,31 0,78 <4,2 0,4 0,78 <0,008 100 16. példa 35 fiziológiás sóoldatot és 25 mikroliter 3%-os vörösvérsejt szuszpenziót adtunk, a lemez óvatos rázogatá- Hemagglutináció GC szál készítményekkel sával elegyítettük és 4 °C-on tartottuk. Az eredménye-Általános módszerek két 1 -2 óra elteltével olvastuk le. Antikoagulánsként etiléndiamino-tetraecetsavat 40 tartalmazó, 0 vércsoportú emberi vért szereztünk be vérbankból. Frissen különítettük el a vörösvérsejteket, olyan módon, hogy a vér egy alikvot részét 4-szer kimostuk 15-szörös térfogatú, 7,3 pH-értékű, 0,01 M foszfátpuffert tartalmazó fizio- 45 lógiás sóoldattal, és 3 térfogat%-os szuszpenziót készítettünk ugyanezzel a pufferoldattal. l,0mg/ml töménységű oldatokat készítettünk Pittsburgh 3-2 ATCC 31149) és CDC M-2 50 (ATCC 31148) szálakból. A készítmények koncentrációját az ultraibolya abszorbancia 280nm-nél végrehajtott, és a fényszórásra korrigált mérésével határoztuk meg. A szálak 1,0 mg/ml töménységű oldatából 50 mikroliter térfogatú alikvot részt- 55 mértünk be egy U-aljú Cooke mikrotitráló lemez első bemélyedésébe, 25 mikroliter, trisz-tartalmú fiziológiás sóoldatot és 0,02% nátrium azidot az összes többi bemélyedésbe, és a szálakból hígítássorozatot készítettünk 25 mikroliteres, kézi mű- 60 ködtetésű hígító berendezés alkalmazásával, egészen a tizenkettedik bemélyedésig. Mindegyik bemélyedés tartalmához 25 mikroliter írisz puffert tartalmazó fiziológiás sóoldatot vagy 65 Eredmények A megfigyelt hemagglutinációt a következőképpen értékeltük: 5+ Sejtszemcse vagy csomó nem látható, vörös színeződés a lemez bemélyedésében. 4* Nyomokban található sejtszemcse. 3+ Kis sejtszemcse, határozott sejtcsomószegéllyel. 2+ Határozott sejtszemcse, amelyet közepes számú csomó szegélyez. + Határozott sejtszemcse néhány csomóval, amelyek a bemélyedés oldalain helyezkednek el A CDC M-2 (ATCC 31148) és a Pittsburgh 3-2 (ATCC 31149) szálak titerét két különböző alkalommal határoztuk meg, ezek képezik a kontroll vizsgálatokat. Az eredményeket a IV. táblázat tartalmazza. A hemagglutináció gátlása: az antitest/antigén komplex eltávolítása az antiszérum-szál elegyekből a hemagglutinációs titer meghatározása előtt 17
