174695. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gentamicin, sziszomicin és garamin előállítására
11 174695 12 Az inkubálási körülményei azonosak az 1. példában leírtakkal. A C/ és D/ táptalajokon kifejlődött tenyészeteket beoltjuk a következő összetételű inokulum illetve fermentációs táptalajokba: C/l. Inokulum táptalaj: húskivonat 3,0 g, triptóz 5 5.0 g, élesztőkivonat 5,0 g, glükóz 1,0 g, keményítő 24.0 g kálciumkarbonát 2,0 g, csapvíz 1000 ml, pH = 7,2. C/2. Fermentációs táptalaj: szójaliszt 30,0 g, dextrin 50,0 g, glükóz 5,0 gjkálciumkarbonát 7,0 g, 10 csapvíz 1000 ml,pH = 7,2. D/l. Inokulum táptalaj: szójaliszt 8,0g, élesztőkivonat 1,0 g, kukoricakeményítő 10,0 g, szacharóz 3.0 g, kálciumkarbonát 3,0 g, szójaolaj 1,0 g, csaoví? 1000 ml,pH = 7,2. P D/2. Fermentációs táptalaj: szójaliszt 30,0g, kukoricaliszt 25,0 g, dextrin 10,0 g, kálciumkarbonát 5.0 g, szójaolaj 3,0 g, csapvíz 1000 ml, pH = 7,2. A fermentációs kísérletek lefolytatása azonos módon történik mint az 1. példában, de 8 nap után fejezzük be a fermentációt. A megfelelő időpontokban összehasonlítjuk a C/ és D/ táptalajokon kifejlődött tenyészetek enzim aktivitásait, valamint összes antibiotikum aktivitásait: Inokulum 48 ó Fermentáció 48 ó Fermentáció--------------------------------------------------------------- befejezésekor amíláz proteáz amiláz proteáz összm-SKB/ml p-A/ml m-SKB/ M-A/ml antibiotikum /ml C) táptalajokon kifejlődött tenyészetek aktivitása 100% 100% 100% 100% 100% táptalajokon kifejlődött tenyészetek aktivitása 180% 130% 250% 160% 140% 5. példa 30 A Micromonospora purpurea varietas nigrescens (X-148) MNG-00122 törzs mélyhűtve (—15°C-on) tárolt vegetatív tenyészetéből olyan hígítást készítünk steril desztillált vízzel, hogy a szuszpenzió élő csíra száma 10s—106/ml legyen. Ennek a szuszpen- 35 ziónak 1 ml-ével beoltjuk az 1. példa szerinti B/ táptalajt, melynek 1000 ml-ébe, 1,0 g sztreptomicinszulfátot, 1,0 g dezoxisztreptaminszulfátot és 1,0 g kobaltklorid • 2 H2 O-t adagolunk. Beoltás után a tenyészetet 37 °C-on inkubáljuk 14 napig. 40 A kifejlődött tenyészetből steril desztillált vízzel 10s —10®/ml élő csíra tartalmú szuszpenziót készítünk, amely spórákat, micéliumdarabkákat tartalmaz. Ezután a vizes szuszpenziót 5 mm vastagságú rétegben ultraibolya besugárzásnak tesszük ki úgy, 45 hogy a túlélők száma 5-10*% között legyen. Az ultraibolya besugárzás után a szuszpenzió 1—1 ml-ével beoltjuk az 1. példában leírt módon kiegészített B/ táptalajt. A tenyésztési körülmények, a fermentációs kísérletek azonosak az 1. 50 példában leírtakkal. A fermentlé összes gentamicin antibiotikum és sziszomicin tartalma a fermentáció befejezésekor 1470 E/ml (ebből a sziszomicin tartalom 130E/ml), a garamin tartalma 90 gamma/ml, a mért enzim aktivitások közel azonosak az 1. példá- 55 ban közöltekkel. 6. példa Mindenben az 5. példa szerint járunk el, de a 60 fermentációs táptalaj összetétele a következő: szójaliszt 45 g, kukoricaliszt 35 g, kálciumkarbonát 5 g, kukoricakeményítő 10g, kobaltklorid • 2H2O 3,5 mg, szójaolaj 4 g, csapvíz 1000 ml, pH = 6,7-6,9. 65 Ebben az esetben a fermentáció befejezésekor a fermentlé összes gentamicin antibiotikum és sziszomicin tartalma 1620 E/ml, (ebből a sziszomicin tartalom 130 E/ml) a garamin tartalma 110 gamma/ml. 7. példa Az 1. példa szerint előállított oltóanyagot, mely a B/l táptalajon fejlődött ki, beoltjuk egy 3 m3 hasznos térfogatú, szénacél szerkezeti anyagú előfermentorba, mely a következő összetételű steril ionokulum táptalajt tartalmazza: szójaliszt 30 kg, kukoricakeményítő 30 kg, szacharóz 30 kg, kálciumkarbonát 4 kg, pálmaolaj 3 kg, csapvíz 3000 liter, pH = 6,7-6,9. Az üzemi oltóanyag előállításához 180 m3 /óra levegőztetést alkalmazunk, a keverő fordulatszáma 180/perc, a hőmérsékletet 35 °C-on tartjuk. Ily módon 42—48 óra alatt az oltóanyag kifejlődik. Ekkor a kifejlődött oltóanyagból 300 litert átoltunk egy 3 m3 hasznos térfogatú, szénacél szerkezeti anyagú fermentorba, mely a következő összetételű steril fermentációs táptalajt tartalmazza: szójaliszt 135 kg, kukoricaliszt 105 kg, kálciumkarbonát 15 kg, kukoricakeményítő 30 kg, kobaltklorid • 2H20 10,5 g, pálmaolaj 12 kg, csapvíz 3000 liter, pH = 6,7—6,9. A fermentációt 32 °C-on folytatjuk le, a levegőztetés 180 m3/óra, a keverő fordulatszáma 180/perc. A fermentáció befejezésekor a fermentlé összes gentamicin antibiotikum és sziszomicin tartalma 1410 E/ml, (ebből a sziszomicin tartalom 120 E/ml) a garamin tartalom 100 gamma/ml. 6
