174695. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gentamicin, sziszomicin és garamin előállítására
7 174695 8 A kiegészített B) táptalajon kifejlődött tenyészetet még háromszor átoltjuk ugyanazt a kiegészített B) táptalajt és inkubálási körülményeket használva. Majd az A) és B) szilárd táptalajokon kifejlődött tenyészetekből beoltjuk a következő összetételű inokulum és fermentációs táptalajokat. A tenyésztést 28 °C-on, inokulum előállítás esetén 2 napon keresztül, fermentáció esetén 6 napon keresztül folytatjuk excenteres síkrázóasztalon (280 fordulat/perc, 2,5 cm lökethossz). A fermentáció oltásához 5% oltóanyagot használunk. Az alkalmazott táptalajok összetétele a következő: A/l. Inokulum táptalaj: burgonyakeményítő 10.0 g, szacharóz 5,0 g, élesztőkivonat 5,0 g, kazein hidrolizátum 4,0 g, pepton 2,0 g, kálciumkarbonát 4.0 g, kukoricalekvár (sz.a.) 1,0 g, pálmaolaj 2,0 g, csapvíz 1000 ml, pH = 6,8—7,0. (500 ml-es Erlenmeyer lombikban 70 ml táptalaj). A/2. Fermentációs táptalaj: szójaliszt 30,0g, burgonyakeményítő 15,0g, glicerin 15,0 g, kálciumkarbonát 5,0 g, kobaltklorid • 2HjO 2 mg, pálmaolaj 2,0 g, csapvíz 1000 ml, pH = 6,6-6,8. (500 ml-es Erlenmeyer lombikban 50 ml táptalaj). B/l. Inokulum táptalaj: szójaliszt 10,0g, kuko- 5 ricakeményítő 10,0g, szacharóz 10,0g, kálciumkarbonát 4,0 g, pálmaolaj 3,0 g, csapvíz 1000 ml, pH = 6,7-6,9 (500 ml-es Erlenmeyer lombikban 70 ml táptalaj). 10 B/2. Fermentációs táptalaj: szójaliszt 30,0 g kukoricaliszt 25,0 g, kálciumkarbonát 4,0 g, kobaltklorid • 2H2 O 2 mg, pálmaolaj 4,0 g, n csapvíz 1000 ml, pH = 6,7—6,9. (500 ml-es Erlenmeyer lombikban 50 ml táptalaj). 15 Az A/ szilárd táptalajon kifejlődött tenyészetet az A/l-A/2, a B/ szilárd táptalajon kifejlődött tenyészetet a B/l—B/2 táptalajokba^oltjuk. Megmérjük az inokulumok átoltás kori (48 órás) tenyészetében, valamint a fermentáció 48. órájában 20 a tenyészet amiláz és proteáz aktivitását: Inokulum 48 ó Fermentáció 48 ó amiláz m-SKB/ml A) táptalajokon kifejlődött tenyészetek enzim aktivitása 10 B) táptalajokon kifejlődői', tenyészetek enzim aktivitása 150 A fermentáció befejezésekor az A/3 fermentlé összes gentamicin antibiotikum és sziszomicin tar- 40 talma 670 E/ml (ebből a sziszomicin tartalom 50 E/ml), garamin tartalma 40 gamma/ml, a B/3 fermentlé összes gentamicin antibiotikum és sziszomicin tartalma 1210 E/ml, (ebből a sziszomicin tartalom 90 E/ml), garamin tartalma 70 gamma/ml. 45 proteáz amiláz proteáz ju-A/ml m-SKB/ml p-A/ml 35 25 15 170 320 250 2. példa Az 1. példa szerinti A/ táptalajokhoz hasonlítva azonos törzzsel és azonos feltételek mellett végezzük a kísérleteket, de a B/ szilárd táptalajban a következő metabolitokat, antimetabolitokat, szervetlen vegyületeket alkalmazzuk, és a fermentáció befejezésekor mérjük az összes gentamicin antibiotikum és sziszomicin tartalmat, valamint a megfelelő időpontokban az enzim aktivitásokat: összes gentamicin antibiotikum és sziszomicin tartalom A) táptalaj 100% B) táptalaj ♦ sztreptomicinszulfát 1,8 g/1 125% ♦ neomicinszulfát 0,7 g/1 120% + kanamicinszulfát 4,0 g/1 130% ♦ gentamicin C szulfát 2,2 g/1 120% + gentamicin B szulfát 4,0 g/1 115% + gentamicin A szulfát 4,0 g/1 110% + gentamicin X szulfát 4,0 g/1 110% 4
