174593. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új dioxolanil-metil-imidazol-származékok előállítására
9 174593 10 A fungicid hatás vizsgálatát Sabouraud-féle táptalajjal olyan vizsgálócsövekben végeztük, amelyek mindegyike autoklávban 120°C-on 15 percen át kezelt táptalajból 4,5 ml-t tartalmazott. A kísérleti vegyületeket 20 mg/ml koncentrációban 50 térfogat % etanol és 50 térfogat % víz elegyében oldottuk fel, majd steril desztillált vízzel a kapott oldatokat 10 mg/ml koncentrációjúra hígítottuk. Ezután egymásután tízszeres hígításokat végeztünk desztillált vízzel törzsoldat-sorozat készítése céljából. A Sabouraud-féle táptalajból 4,5 ml-t tartalmazó vizsgálócsövek mindegyikébe tehát valamelyik törzsoldatból 0,5 ml-t adtunk, amikor is így a vizsgálandó vegyület koncentrációja az 5 ml-nyi közeg 1 ml-ében 100 mikrogramm, 10 mikrogramm, 1 mikrogramm vagy 0,1 mikrogramm. Fonalas gombákat 25 °C-on 2-3 héten át inkubáltunk. A tenyészetből 2-2 mm oldalhosszű négyzeteket vágtunk ki és ezekkel oltottunk. Az élesztőgombák esetében oltóanyagként Sabouraud-féle táptalajon kapott 3 napos tenyészetből 0,05-0,05 ml-t használtunk. Oltás után az összes tenyészetet 25 °C-on 14 napon át inkubáltuk. A végső értékelést 2 hét elteltével végeztük és a kapott eredményeket az alábbi skála szerint osztályoztuk: xxxx = a növekedés teljes gátlása 0,1 mikrogramm/ml koncentrációban xxx = a növekedés teljes gátlása 1,0 mikrogramm/ml koncentrációban xx = a növekedés teljes gátlása 10 mikrogramm/ml koncentrációban x = a növekedés teljes gátlása 100 mikrogramm/ml koncentrációban 0 = nincs hatás, vagyis növekedés észlelhető a legnagyobb vizsgált koncentráció [100 mikrogratnm/ml] esetében is. Első kísérletsorozatban a vizsgált vegyületeket az alábbi 11 gombával szemben próbáltuk ki (a gomba vagy baktérium teljes neve után zárójelben megadott rövidítést fogjuk majd használni az alábbi táblázatban): 1. Microsporum canis (M. c.) 2. Ctenomyces mentagrophytes (Cr. m.) 3. Trichophyton rubrum (Tr. r.) 4. Phialophora verrucosa (Ph. v.) 5. Cryptococcus neoformans (Cr. n.) 6. Candida tropicalis (C. tr.) A) táblázat 7. Candida albicans (C. alb.) 8. Mucor species (Mue.) 9. Aspergillus fumigatus (A. f.) 10. Sporotrichum schenckii (Sp. s.) 5 11. Saprolegnia species (Sap.) A kapott eredményeket az A) táblázatban adjuk meg. Számos olyan kísérleti vegyületet, amely 10 mikrogramm/ml koncentrációban hatásosnak bi- 10 zonyult a Phycomycetes mucor gomba ellen, kipróbáltunk még a phycomycetákhoz tartozó alábbi négy további species ellen: 1. Absidia ramosa (Abs. r.) lí 2. Basidiobolus meristosporus (Bas. m.) 3. Mortierella species (Mort.) 4. Rhizopus (Rhi.) E második kísérletsorozatnál a kísérleti módszer 20 tökéletesen egyező volt az első kísérletsorozatnál alkalmazott és a fentiekben részletesen ismertetett kísérleti módszerrel. A kapott eredményeket a B) táblázatban adjuk meg. A baktericid hatás vizsgálatát fenolvörös-dextróz- 25 -táptalajon (Difco-táptalaj) végeztük. A kísérleti vegyületek esetében ugyanazon decimális hígítási módszert alkalmaztuk, mint a fentiekben ismertetett, fungicid hatásra vonatkozó kísérleteknél. Oltóanyagként 24 órás tenyészetekből platinából 30 készült oltókaccsal (5 mm átmérőjű) vett mennyiségeket használtunk. 48 órával az inkubálás után mindegyik tenyészetből szubkultúrákat készítettünk és a kísérleti vegyületek baktericid hatásának megállapítására a szubkultúrákat 7 napon át inku- 35 háltuk, majd megállapítottuk, illetve a fentiekben ismertetett elv szerint értékeltük, hogy van-e növekedés vagy nincs. A kísérleti vegyületeket az alábbi Gram-negatív bacillusokkal szemben vizsgáltuk: 40 1. Salmonella pullorum gallinarum (SPG) 2. Escherichia coli (E. coli) 3. Pseudomonas aeruginosa (Ps. aer.) 45 a kísérleti vegyületeket ugyanakkor az alábbi Gram-pozitív bacillusokkal és coccusokkal szemben is vizsgáltuk: 1. Erysipelothrix insidiosa (E. ins.) 50 2. Staphylococcus haemolyticus (Staph.) 3. Streptococcus pyogenes (Strept.) A kapott eredményeket a C) táblázatba foglaltuk. le általános képletű vegyületek Fungicid hatás Rí r2 M. c. (1) Ct. m. (2) Tr. r. (3) Ph. v. (4) Cr. n. (5) C. tr. (6) C. alb. (7) Muc. (8) A. f. (9) Sp.s. (10) Sáp. (11) 4—Cl 4-C1 xxxx XXXX XXXX X XXX XX X XXX XXX XX XX 4-C1 H XX XXX XXX X XX 0 X X XX XX X 4—Cl 2,4-(Cl)2 XX XXX XXX X XX 0 X X X XX X
