174539. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új BU-2183 antibiotikumok előállítására
17 174539 18 1,4-diamino-l ,4-didezoxi-d-szorbitot a 4-anűno-4- -dezoxi-d-glükózból, ez a vékonyrétegkromatográfiás és NMR-vizsgálatok szerint azonos az aglikonnal. A B komponens fent leírt savas metanolízise útján nyert aminocukor Amberlite CG-50 ioncserélő gyantán végzett kromatográfia útján tovább tisztítható, és egy metil-glikozid a- és ^-formájává választható szét, ahol az a-forma a főtermék. Az a-metil-glikozid N-acetilezése révén színtelen prizmás kristályokat nyerünk, olvadáspontjuk: 185-186 °C. Analízise: C9H17NOs képletre: számított: C = 45,95%, H = 7,28%, N = 5,95%, talált: C = 45,93%, H = 7,43%, N = 5,88%. Ezen N-acetil-származék tömegspektrumában m/e = 204 (M-31) tömegszámértéknél egy a glikozidos metoxicsoport lehasadásának megfelelő csúcs jelenik meg. Ebből a szabad aminocukor összegképletére C(H13N05 adódik. A metil-glikozid a- és (3-formája tetra-N,0-acetil-származékok infravörös és NMR-spektruma alapján metil-4-amino-4-dezoxi-a-, illetve -0-d-glükopiranozidként azonosítható. E cukroknak a 4-trehalózaminból izolált autentikus mintáinak infravörös spektruma [J. Antibiotics, 27, 145, (1974)] azonos a kísérleti mintáinak infravörös spektrumával. A Bu—2183 D 6 normál sósavval (3 óra forralás) végzett savas hidrolízise a Bu-2183 B hidrolizátumból nyerttel azonos aglikont és aminocukrot szolgáltat. A nyers Bu—2183 komplex kromatográfiás szétválasztása útján nyert Bu—2183 C-t 1 normál sósavat tartalmazó metanollal 3 órát forralva hidrolizáljuk. Az aglikon-rész azonos a többi Bu-2183 komponensből nyerhetővel, és a cukor-rész vékonyrétegkromatográfia, NMR-spektrum és gázkromatográfia segítségével metil-d-glükozidként azonosítható. A Bu-2183 eszerint Cj2H2*N209. A fenti eredmények alapján a Bu-2183 komponensek szerkezetét az V általános képlettel írhatjuk le, ahol R jelentése az egyes komponensekben a következő: Bu-2183 komponens R 5 A2 n-C3H7CONH C HOD H2N-10 Antimikrobiális aktivitás Az in vitro tesztek azt mutatják, hogy a IS Bu—2183 komplex és a Bu—2183 A, A2 és B jelű komponensek széles spektrumú antibakteriális aktivitással rendelkeznek. Az antibiotikum-komplex és az egyes aktív komponensek különösen jól alkalmazhatók a legtöbb aminoglikozid-rezisztens mikro- 20 organizmus gátlására. A Bu-2183 A2 jelű komponens aktívabb, mint a Bu—2183 B, de kevésbé aktív, mint a Bu—2183 A. A Bu—2183 A és B számos baktériummal 25 szemben mutatott minimális gátló koncentrációját (MIC) agarlemezeken, a kettős agarhígításos módszerrel határozzuk meg. E célra a Steers et al által leírt sorozatátoltó eszközt használtuk. Az inokulum mennyiségét a teszt-mikroorganizmusok egy éjsza- 30 kán át szívinfúziós táptalajon (Difco) tenyésztett mintáinak 104-szeres hígítására állítottuk be. A 6. táblázatban mutatjuk be az eredményeket, az összehasonlító antibiotikumként vizsgált kanamicin hasonló adatai mellett. 35 Az MIC-értékeket tekintve a Bu—2183 A és B tényleges aktivitása mérsékelt vagy elég gyenge, ezen belül az A komponens kb. 2—4-szer aktívabb, mint a B. Viszont széles spektrumú antibakteriális 40 aktivitást mutatnak Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumokkal szemből, beleértve sok aminoglikozid-rezisztens mikroorganizmust és Pseudomonas törzseket is. A 7. táblázatban a Bu-2183 A és A2 komponens számos patogén mikroorganizmussá] 45 szemben mérhető minimális gátló koncentrációját mutatjuk be. Bu—2183 komponens R A Bu—2183 komplex egy kb. 30—40%-os tiszta----ságú mintája az E. coli A20365-öt 12,5 mikro-A C2HjCONH— 50 gramm/ml, a K. pneumoniae D-ll-et 12,5 mikrogramm/ml és a ft. aeruginosa A9930-at 25 mikro- B CHjCONH— gramm/ml koncentrációban gátolta. 6. táblázat A Bu-2183 A és B antibakteriális spektruma Kódjel Teszt mikroorganizmus Sa—2 Staphylococcus aureus Smith Sa—3 Staphylococcus aureus D193 MIC (mikrogramm|ml) 2183 A Bu-2183 B Kanamycin.A 12,5 50 0J 25 25 0,4
