174539. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új BU-2183 antibiotikumok előállítására
9 3. táblázat folytatása 174539 10 Szúbsztrát 1 D946-B83 jelű törzs Ps. fluorescens NIHJ B254 Ps. aeruginosa ATCC19660 Geraniol _ _ 4 Keményítő — — — Cellulóz— — Inunn — — — Szalicin —Acetát + 4 4 ftopionát + 4 4 j3-Hidroxi-butirát + 4 4 2-Keto-glukonát 4 4 4 Szukcinát 4 4 4 Maleát — — — Glikollát — — — Dl-Laktát 4 4 4 Pelargonát 4 4 4 Adipát— 4 p-Hidroxi-benzoát 4 4 4 m-Hidroxi-benzoát— — Metanol — — 4 Etanol — — 4 n-Propanol-4 Fenol — — — Krezol — — 4 Mono-etanolamin — — — Mono-etilamin — — Dietilamin — — — Trietilamin — — — Tesztoszt erőn — — — Acetamid — — 4 Arginin 4 4 4 Valin 4 4 4 Norleucin — — — d-Triptofán — — — Ő-Amino-valerát 4 — 4 Bétáin 4 4 4 Putreszcin 4 4 4 Az alapközeg literenként 40 ml 1 mólos foszfát-pufferoldatot (pH - 6,8), 1 g ammónium-szulfátot és 20 ml Hutner-féle vitaminmentes ásványi só oldatot tartalmaz. Rendszertani besorolás A fent leírt morfológiai, kulturális és élettani tulajdonságai alapján a D946-B83 jelű törzs a Pseudomonas csoportba tartozik. A Stainer et al [R. Y. Stainer, N. J. Palleroni és M. Doudoroff: The Aerobic Pseudomonads: A Taxonomie Study, J. Gen. Microbiol. 43, 159-271, (1966)] által az aerob Pseudomonasokra javasolt besorolási rendszer szerint a D946—B83 jelű törzs közeli rokonságban áll a Pseudomonas fluorescens-szel, kivéve negatív tojássárgája-tesztjét, negatív inozit-hasznosítását és azt, hogy nem termel oxidázt. A Stainer által vizsgált 13 aerob Pseudomonas-faj közül csak a fteudomonas mahophiliá-ról írták le, hogy negatív oxidáz reakciót ad. Ez utóbbi mikroorganizmus azonban lényegesen különbözik a D946-B83 jelű törzstől, amennyiben nem termel fluoreszkáló színanyagot, pozitív metionin-igénye van, 4°C-on nem növekszik, arginin -dihidroláz -ha sznosít ása negatív, és szubsztrát-hasznosításuk is különbözik. Ezért úgy tekinthetjük, hogy a D946-B83 jelű törzs a Pseudomonas nem egy új fajához tartozik. Az antibiotikumok előállítása A találmány szerint a Bu-2183 antibiotikum előállítására úgy járunk el, hogy a Pseudomonas sp. D946—B83, A. T. C. C. 31086 jelű törzset, egy új Pseudomonas faj képviselőjét süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények mellett, vizes táptalajon tenyésztjük. Felhasználható szénforrásokat, például egy felhasználható szénhidrátot tartalmazó táptalajon növesztjük a mikroorganizmust. Előnyösen alkalmazható szénforrások például a glükóz, fruktóz, mannóz, glicerin és hasonlók. Felhasználható nitrogénforrásokat, mint például hallisztet, szójalisztet, peptonokat stb. is kell a táptalajnak tartalmaznia. A táptalajban szervetlen sók is lehetnek, ezek bármely szokásos, nátrium-, kálium-, ammonium-, kalcium-, foszfát-, szulfát-, klorid-, bromid-, nitrát-, karbonát- és hasonló ionokat szolgáltató sók lehetnek. A találmány szerinti eljárás egyik előnyös kivitelezési változata szerint a Bu-2183 komplexet a mikroorganizmus kielégítő mértékű növekedéséhez kedvező bármely hőmérsékleten, például 10—32 °C közötti hőmérsékleten, legelőnyösebben azonban kb. 28—30 °C körüli hőmérsékleten állítjuk elő. Általában 3-5 nap alatt nyerjük a terméket optimális termeléssel. A táptalaj optimális pH-tartománya 5,5-9,5 között van, de legelőnyösebben 7 körüli értékre állítjuk be a közeg pH-ját. Tartályfermentorban végzett fermentálás céljaira először a mikroorganizmus ferdeagar- vagy talajtenyészetével való átoltás útján vegetatív inokulumot készítünk, majd ezt visszük be steril körülmények között a tartályfermentorban levő táptalajba. A találmány szerinti eljárás egyik előnyös kivitelezési változata szerint a Bu-2183 antibiotikum-komplex előállítására a következőképpen járunk el: A sterilizálás előtt 7-es pH-értékre beállított, 3% glükózt, 2% hallisztet, 0,5% szójalisztet, 0,2% peptont és 0,6% kalcium-karbonátot tartalmazó oltóközeg beoltására a Pseudomonas D946—B83 jelű törzs egy jól növekedő ferdeagar-tenyészetét használjuk. 28 °C-on 48 órán át, egy (percenkénti 250-es fordulatszámú) forgó rázóasztalon inkubáljuk az oltóközeget, majd e közeg 2 ml-nyi mennyiségét egy 500 ml-es Erlenmeyer lombikban levő, 100 ml térfogatú, 2% glicerint, 2% lenmagolajat, 1% földimogyoróolajat, 2% hallisztet, 0,3% ammónium-szulfátot és 0,5% kalcium-karbonátot tartalmazó fermentációs táptalajhoz adjuk. 28 °C-on végzett rázatással 3—5 nap alatt étjük el az optimális antibiotikum-termelést. A fér mentié antibiotikum-aktivitását a papírkorongos-agardiffúziós értékmérési módszerrel, tesztorganizmusként Bacillus sub-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6S 5
