174299. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kérődzők tápanyaghasznosításának fokozására alkalmas A-28 086 jelű antibiotikum A vagy D jelű összetevőit tartalmazó szarvasmarha-takarmány előállítására
15 174299 16 elemanalízis adatai szerint 67,329c szenet, 9,27% hidrogént és 23,41% oxigént tartalmaz. Az A 28 086 D acetilészter kloroformban felvett infravörös spektrumában az alábbi hullámszámoknál találhatók abszorpciós maximumok: 3490, 2970, 2935, 2880, 2860 (váll), 1745, 1725, 1565, 1470, 1385, 1330, 1295, 1255,1190, 1155 (váll), 1130, 1115, 1100, 1060, 1040 (váll), 1020, 1000, 970, 950, 925 és 895 cm’1. Az A 28 086D-n-butirilészter szilárd, fehér anyag, molekulasúlya tömegspektrometriával meghatározva 848, tapasztalati képlete C4gHgoOi2, az elemanalízis adatai szerint 67,93 szenet, 9,43% hidrogént, és 22,44% oxigént tartalmaz. Az A 28 086D-n-butirilészter kloroformban felvett infravörös abszorpciós spektrumában a következő hullámszámoknál találhatók abszorpciós maximumok: 3480, 2970, 2940, 2880, 2860 (váll), 1740, 1725, 1710 (váll), 1565, 1470, 1390, 1330, 1292, 1190, 1130, 1115, 1100, 1060, 1028, 1000, 970, 955 (váll), 920, 910 és 890 cm'1. Az A 28 086D faktor acetil- és n-butirilészter-származékától szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiával választható el futtató szerként etilacetátot használva. Előhíváshoz vanillin spray reagens használható (3%-os metanolos vanillin-oldat + 0,5 ml tömény kénsav 100 ml oldata). Az A 28 086D faktor és acetil- illetve n-butirilészter-származékai ebben a rendszerben a következő Rf-értékeket adják: A 28 086D 0,29 A 28 086D acetilészter 0,54 A 28 086D n-butirilészter 0,61 Az A 28 086D faktor, valamint 2—6 szénatomos etilészterei ugyancsak képesek a sóképzésre. A találmány szerinti szarvasmarha takarmányban alkalmazható például a megfelelő gyógyászatilag elfogadható alkálifém-, alkáliföldfém- és aminsók is. Ahogy azt az előzőekben már ismertettük, az emlősök szénhidrát-hasznosítását azok a szerek növelik, amelyek úgy befolyásolják az állat bendőjében élő baktériumokat, hogy azok elsősorban propionátokat, ne pedig acetátokat vagy butirátokat hozzanak létre. A takarmány hasznosításának mértékét a keletkező propionátok koncentrációjának mérésével a következő módon állapíthatjuk meg: egy ökör bendőjéből sebészi úton bevezetett kanüllel bendőfolyadékot veszünk. Az ökröt nagyszemű takarmánnyal etetjük. A bendőfolyadékot négyrétegű vásznon át szűrjük, a szürletet összegyűjtjük. A szűrőágyon maradó darabos anyagot a bendőfolyadék eredeti térfogatának megfelelő mennyiségű fiziológiás pufferben szuszpendáljuk, majd ezt ismét szűrjük. A következő összetételű puffert használjuk: összetevő g/liter dinátrium-hidrogénfoszfát 0316 kálium-dihidrogénfoszfát 0,152 nátrium-hidrogénkarbonát 2,260 káliumklorid 0,375 nátriumkl'orid 0,375 magnéziumszulfát 0,112 kalciumklorid-dihidrát 0,050 vas(II)-szulfát-heptahidrát 0,008 mangánszulfát-hidrát 0,004 cinkszulfát -heptahidrát 0,004 réz(II)-szulfát-pentahidrát 0,002 kobaltklorid-hexahidrát 0,001 [Cheng és munkatársai, J. Dairy Sei., 38, 1225-1230 (1955).] Egyesítjük a két szűrletet, majd addig hagyjuk állni, míg darabos anyag különül el a felszínen. Élkülönítjük az átlátszó réteget, 1 :1 arányban a fenti összetételű puffénál hígítjuk, majd pH-ját 6,8 és 7,0 közötti értékre állítjuk be. 25 ml térfogatú lombikba 10 ml hígított bendőfolyadékot öntünk, majd 40 mg, az előzőekben megadott takarmánnyal, 1 mg szójabab fehérjével és a vizsgálandó vegyülettel egészítjük ki az oldatot. Kísérletként 4 párhuzamos lombikot használunk. Kétszer négy darab kontroli-lombikot is indítunk. A méréseket egy nulla órás és egy inkubált, 16 órás kontrollal végezzük. Mindegyik kísérleti lombikot 16 órán át, 38 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Az inkubáció után megmérjük a pH-kat, és mindegyik lombikhoz 25% (2 ml) metafoszforsavat adunk. Ülepedni hagyjuk a mintákat, majd a propionát-, acetát- és butirát-származékok meghatározására gázkromatográfiásán analizáljuk a felülúszókat. Az aktív vegyületek szignifikánsan növelik a kontrollokhoz képest a propionát-termelést. A vizsgált vegyületekkel kapott eredményeket statisztikusan összehasonlítjuk a kontroli-eredményekkel. A 3. táblázatban megadjuk a hatóanyagot tartalmazó lombikok illékony zsírsav-koncentrációjának a kontrollokhoz viszonyított arányát. A szénhidrát-hasznosítás fokozódását in vivo vizsgálattal további bizonyítékokkal támasztjuk alá oly módon, hogy a bendőtartalom kivezetésére alkalmas kanüllel látjuk el az állatokat. A 4. táblázatban megadott eredményekkel zárult kísérleteket kifejlett, egyenként körülbelül 455 kg súlyú, sipollyal ellátott ökrökkel végezzük. Két állatot közönséges táplálékkal, és a 4-4 állatból álló kísérleti csoportokat A 28 086 A-val kiegészített táplálékkal etetünk. 100 ml bendőfolyadékhoz 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
