174186. lajstromszámú szabadalom • Eljárás L 13365 antibiotikum előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTARSASAG i SZABADALMI LEÍRÁS 174186 Bejelentés napja: 1977. VI. 28. (LE-807) Nagy-Britannia-i elsőbbsége: 1976. VI. 29. (26934/76) Nemzetközi osztályozás: C 07 D 9/14, ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1979. IV. 28. Megjelent: 1980. V. 3i.Feltaláló: Szabadalmas: Pagani Hermes vegyész, Sesto San Giovanni, Parenti Francesco biológus, Gruppo Lepetít S.p.A., Milánó, Coronelli Carolina vegyész, Tamoni Giorgio vegyész, Milánó, Olaszország Olaszország Eljárás L 13365 antibiotikum előállítására A találmány tárgya eljárás új antibiotikum előállítására, az Actinoplanes nembe tartozó Actinoplanes sarveparensis fajjal kivitelezett fermentációval. Az új, a következőkben L 13 365 jellel jelölt antibiotikum világossárga színű kristályos vegyület, 5 amelynek jellemző olvadáspontja, infravörös és ultraibolya elnyelési maximuma van. Ahogy a fentiekben megadtuk, az L 13 365 antibiotikumot az Actinoplanes sarveparensis törzs tenyésztésével állítjuk elő. A törzset, gyüjtemé- 10 nyűnkben az A/13826 jelet kapta, az indiai Sárve par Village mellett gyűjtött földmintából izoláltuk. A törzset letétbe helyeztük a CBS (Central Bureau Voor Schimmelcultures - Oosterstraat - 1 - Baarn - Hollandia) törzsgyűjteményébe, ahol az 15 a 305,76 sorszámot kapta. A találmány szerinti eljárás értelmében az L 13 365 antibiotikum előállítására a fenti mikroorganizmust levegőztetett körülmények között vizes, felhasználható szén- és felhasználható nitro- 20 génforrást és szervetlen sókat tartalmazó táptalajon tenyésztjük. Általában úgy járunk el, hogy az antibiotikumot termelő törzset rázott lombikban előtenyésztjük, majd amikor már jelentős mennyiségű antibiotikum 25 szintetizálódott, beoltunk vele egy tankfermentort, amely a főfermentációs táptalajt tartalmazza. A tenyésztést 25 °C és 35 °C közötti hőmérsékleten, levegőztetés közben addig folytatjuk, míg jelentős mennyiségű antibiotikum halmozódik fel a 30 2 táptalajban. Ez idő alatt az antibiotikum koncentrációjának meghatározására agar-diffúziós biológiai értékmérést végzünk. Az antibiotikum elkülönítésére szűréssel elválasztjuk a micéliumot, az antibiotikumot a szűrt tenyészléből ismert eljárásokkal, mint például szerves, az antibiotikumot oldó és vízzel nem elegyedő oldószerrel kivitelezett extrakcióval különítjük el. Az extrakciót 2 és 4 közötti pH-jú szűrt tenyészlével végezzük. Szerves oldószerként előnyösen 1—6 szénatomos alkanolokat, rövidszénláncú alifás savak 1—4 szénatomos alkil-észtereit vagy rövidszénláncú halogénezett szénhidrogéneket használunk. Az oldószert nagy fordulatszámon történő centrifugálással különítjük el a tenyészlétől, eredeti térfogatának 1/200—1/400-ad részére töményítjük, lehűtjük, és addig hagyjuk állni, míg csapadék válik ki az oldatból, amit szűréssel különítünk el. Ez a csapadék tiszta L 13 365 antibiotikumból áll. Az anyalúgot összegyűjtjük, és fölös mennyiségű nem reakcióképes, apoláros oldószerbe, mint például petroléterbe öntjük, amikor további mennyiségű nyers L 13 365 antibiotikumot kapunk. Az így kapott nyersterméket metanol és aceton elegyében oldjuk, majd kicsapjuk az oldatából savas víz adagolásával. Egyesítjük a két terméket, és oszlopkromatográfiával, az eluálást kloroform és metanol elegyével végezve tovább tisztítjuk. 174186
