174127. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alkálifém- vagy ammónium-inzulin tisztítására gélszűréssel
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS 174127 Bejelentés napja: 1975. I. 30. (El—594) Nemzetközi osztályozás: C 07 C 103/52, A 61 K 37/26 ORSZÁGOS találmányi HIVATAL Közzététel napja. 1979. IV. 28. Megjelent: 1980. IV. 30. Feltaláló: Szabadalmas: ■Jackson Richard Lee vegyész, Indianapolis, Indiana, Eli Lilly and Company, Indianapolis, Amerikai Egyesült Államok Indiana, Amerikai Lgyesült Államok Eljárás alkálifém- vagy ammónium-inzulin tisztítására gélszűréssel 1 A találmány tárgya új eljárás alkálifém- vagy ammónium-inzulin tisztítására gélszüréssel 2,0-3,5 pH tartományban. A találmány szerinti eljárás értelmében az alkálifém- vagy ammónium-inzulin tisztítására szol- 5 gáló eljárást úgy hajtjuk végre, hogy egy száraz állapotban legalább körülbelül négy súly százalék mennyiségű vizet visszatartó és körülbelül 100 mikronnál kisebb részecske átmérőjű gélt duzzasztunk, a duzzasztott géllel egy oszlopot megtöltünk, a '-0 megtöltött oszlophoz egy legalább körülbelül 80% tisztaságú alkálifém- vagy ammónium-inzulin vizes oldatát öntjük, mely oldatban az inzulin koncentrációja körülbelül 1 —8 súly% tartományba esik, mimellett az inzulin egész mennyiségének tisztitá- 15 sához egy olyan oszlop szükséges, melyben a töltelék körülbelül 0,8—6,7 gramm/liter ágytérfogatú és az oldat pH-ja körülbelül 2,0-3,5 érték közötti és az inzulint az oszlopról körülbelül 5 és 30 C közötti hőmérséklettartományban egy ugyan- 20 olyan pH-jú vizes eluálószerrel eluáljuk, mint amilyen pH-jú az inzulin-oldat. Az ábra egy elúdós diagram az 1. példához. Az ábra az inzulinoldat egyes frakcióinak optikai sűrűség változását ábrázolja 280 m/j-nál a gél-szűrés 25 folyamán. Mióta 1921-ben a pankreász egyik komponenseként felfedezték, az inzulin világszerte nagy jelentőségre tett szert a „diabetes mellitus” (cukorbaj) kezelésében. Mivel az inzulinnak a pankreász 30 2 szövettől történő elkülönítésére alkalmazott extrakdós eljárás során jelentős mennyiségű nem-inzulin fehéije is elkülönül, figyelemre méltó törekvés terjedt el az inzulin tisztítására szolgáló módszerek fejlesztésében, azaz olyan módszerek keresésére, melyek alkalmasak az inzulinnak a nem-inzulin fehérjéktől történő elkülönítésére. Ezen ipari szempontból fontos legkorábbi módszerek egyike már ismerteti azt a jelenséget, hogy a fehérjének az izoelektromos ponton a legkisebb az oldhatósága, amennyiben a többi tényezőt állandó értéken tartjuk. Bauting és munkatársai az 1 469 994 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban egy olyan tisztítási eljárást helyeztek oltalom alá, mely szerint a pankreász vizes extraktumában levő nem-inzulin fehérjéket izoelektromos pontjukon kicsapják. Az inzulin vizes pankreász extraktumból körülbelül 4 és körülbelül 7 közötti pH értéken történő izoelektromos kicsapását ismerteti Walden az 1 520 673 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban. Egy másik korábbi módszer szerint az inzulin kicsapása hatékonyabban megy végbe elegendő mennyiségű szervetlen só hozzáadásával. Muriin az 1 547 515 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban ismerteti az első eljárást az inzulinnak egy extrakdós oldószerből történő kisózására, mely nátriumklorid hozzáadásával történik. Egy differendál kisózó eljárást imák le 174127
