174117. lajstromszámú szabadalom • Eljárás chinosporin C antibiotikum izolálására
7 174117 8 A második eluálásnál a frakciók aktivitása: Frakdó szám Frakdó térfogata Aktivitás 1. 17 ml 9150 7/ml, 2. 21 ml 91700 7/ml, 3. 20 ml 123500 7/ml, 4. 19 ml 2520 7/ml. A kapott por alakú termék súlya 4,11 g. A munkastandardhoz viszonyított aktivitása 71%. így a kitermelés 21,5%-os. 3. példa Fermentorban levő 1300 liter, 126 ml Chinosporin C-tartalmú, Bacillus coagulans (0100 sz. O.KJ. deponált) alkalmazásával nyert fermentlé pH-ját mintegy 450 ml 96%-os ecetsavval 5,2-re állítjuk be. A fermentlé hőmérsékletét csapvízzel +20 °C-ra, vagy ez alá hűtjük. Ezután 50 liter, 5,2 pH-ra ekvilibrált, a 165 669 lajstromszámú magyar szabadalmi leírás szerint előállított gyantát (Chinoin, Budapest) adagolunk a fermentorba, és megindítjuk a keverést. 1,5 órán keresztül kevertetjük a rendszert, majd 15 percig hagyjuk a gyantát kiülepedni, és elöntjük a felülúszót. A leszívatott felülúszó aktivitása 12 7/ml/ A fermentor alján maradt gyantát csapvízzel rámossuk a szűrővászonnal ellátott kőagyag nuccs-szűrőre. Az eluálást a nuccs-szűrőről végezzük 3 x 20 liter 1 n sósav-oldattal. A lejövő eluátumokat 60%-os nátrium-hidroxid-oldattal azonnal 5,2-es pH-ra állítjuk be. Az esetlegesen kiváló csapadékot dekantálással távoli tjük el. A kapott eluátumok aktivitása: Frakdó Frakdó Aktivitás sorszám térfogat 1. 25 liter 1830 7/ml, 2. 15 liter 3640 7/ml, 3. 20 liter 1325 7/ml. A kapott frakciókat egyesítjük. Az egyesített oldat aktivitása 2262 7/ml. Ezt a 60 liter oldatot +4 és +25 °C közötti hőmérsékleten 85 ml/perc sebességgel átengedjük egy 6 cm átmérőjű, 35 cm magasságú gyantaoszlopon. Az elfolyó oldat aktivitása 282 7/ml. Az eluálást 4 x 500 ml 1 n sósav-oldattal végezzük, és az eluátumokat azonnal semlegesítjük trietilaminnal. A kapott eluátumok aktivitása: Frakció sorszám Frakdó térfogat Aktivitás 1. 490 ml 900 7/ml, 2. 470 ml 48520 7/ml, 3. 560 ml 52000 7/ml, 4. 480 ml 1300 7/ml. A 2. és a 3. eluátum-frakciót egyesítjük, és kétszeres mennyiségű abszolút etanolt adunk hozzá. A kivált csapadékot kiszűrjük, és a szűrletből acetonnal kicsapjuk az antibiotikumot. A kicsapódott antibiotikumot kiszűrjük, és szárítjuk. 71,3 g, a munka-standardhoz képest 85%-os, por alakú terméket kapunk. A kitermelés az eredeti fermentlére számolva 37,2%-os. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás Chinosporin C antibiotikum izolálására Bacillus coagulans törzs süllyesztett, levegőztetett tenyészetéből azzal jellemezve, hogy a tenyészetet 4—7 közötti pH-értéknél fenol-formaldehid-polikondenzádós kationcserélő jellegű szorbens gyantával kezeljük, a tenyészettől izolált fenol-formaldehid polikondenzációs kationcserélő jellegű szorbens gyantát a szorpdós közegnél kisebb, előnyösen 1—4 pH-jú eluenssel eluáljuk, kívánt esetben az eluátumot 4—7 pH közé beállítva ismét kezeljük a fenol-formaldehid polikondenzációs kationcserélő jellegű szorbens gyantával, és az elkülönített kationcserélő jellegű szorbens gyantát ismételten eluáljuk a szorpdós közegnél kisebb, előnyösen 1—4 pH-jú eluenssel, végül a kapott eluátumból — kívánt esetben a szennyező anyagok előzetes eltávolítása után — a Chinosporin C antibiotikumot kicsapással különítjük el. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a szorpdót 5,2 pH-értéken, fenol-formaldehid polikondenzádós kationcserélő jellegű szorbens gyantával hajtjuk végre. 3. Az 1-2. igénypontok szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a szorpdót a fenol-formaldehid polikondenzádós kationcserélő jellegű szorbens gyantával töltött oszlopban, vagy a fenti gyanta bekeverésével hajtjuk végre. 4. Az 1-4. igénypontok szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az elúdót erős ásványi savval, előnyösen 1 n sósav-oldattal hajtjuk végre. 5. Az 1—4. igénypontok szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az eluátumokat szervetlen vagy szerves bázissal, előnyösen 1 n nátrium-hidroxid-oldattal, vagy trietilaminnal semlegesítjük. 6. Az 1—5. igénypontok szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az antibio5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
