174114. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új aminosav-származékok előállítására
13 174114 14 egy 2 x 40 cm-es Dowex 50 x 2 oszlopra visszük, majd vízzel eluáljuk. Körülbelül 120 ml eluátumot gyűjtünk, s ezt vákuumban 35 °C-on bepároljuk. Az anyag kristályosítása és a tiszta termék izolálása az 5. példában ismertetett eljárás szerint történik. A termék 1,72 g 7-L-glutamil-taurin (taurinra számítva 68%). Fizikai állandói megegyeznek az 5. példában megadottal. 8. példa A 4. példában kapott karbobenziloxi-7-L-glutamil-taurint feloldjuk 2 ml 4 mólos jégecetes hidrogén-bromid-oldatban. Az elegyet 30 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 35 °C-on vákuumban bepároljuk. A maradékot éterrel többször eldörzsöljük, az éteres oldatokat az anyagról dekantáljuk. Az anyagot az 5. példányban ismertetett módon átkristályosítjuk és 7-L-glutamil-taurint nyerünk, mely mindenben megegyezik az 5. példa termékével. 9. példa 25,4 ml (0,01 mM) 7-L-glutamil-taurint feloldunk 2 ml vízben, majd 10 ml 0,01 n nátrium-hidroxid-oldatot adunk hozzá. Az elegyet vákuumban 35 °C-on szárazra pároljuk. A fehér kristályos maradékot exszikkátorban foszforpentoxid felett szárítjuk. A termék a 7-L-glutamil-taurin mono-nátrium-sója. Metanolban és etanolban egyaránt igen rosszul oldódik. Éles olvadáspontot nem ad, 200 °C körül zsugorodni kezd, színe fokozatosan mélyül, majd 250 5C körül elszenesedik. 10. példa 7,5 mg (30 pM) 7-L-glutamil-taurinhoz 10 ml abszolút metanolt adunk, amely 0,5 M/liter hidrogén-kloridot tartalmaz. A szuszpenziót 24 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük. A terméket leszálló rendszerű papírkromatográfia segítségével izoláljuk tiszta állapotban az alábbi oldószer-elegyek valamelyikével. Rf (n-butanol-piridin-jégecet-víz 15 :10:3:12) = 0,27 Rf (n-butanol-jégecet-víz 4:1:1) =0,14 A termék 7-(ce-metil)-L-glutamil-taurin. 11. példa Az észteresítést a metilészter előállításakor (lásd 10. példa) ismertetett módon végezzük, hidrogén-kloridot tartalmazó abszolút etanol alkalmazásával. A termék 7-(a-etil)-L-glutamil-taurin. Rf (n-butanol-piridin-jégecet-víz 15:10:3:12) = 0,37 Rf (n-butanol-jégecet-víz 4:1:1) = 0,22. 12. példa 25,4 mg (0,1 mM) 7-L-glutamil-taurint feloldunk 100 pl 2n nátríum-hidroxid-oldatban, az 5 elegyet 0 °C-ra hűtjük, majd 5 perces időközönként három részletben összesen 36 pl ecetsavanhidridet és 180 pl 4 n nátrium-hidroxid-oldatot adunk hozzá intenzív keverés közben. A lúgos oldatot vízzel 2 ml-re hígítjuk és 12 órán át szobahőmérsékleten 10 állni hagyjuk. A nátriumionok eltávolítása céljából az oldatot egy 1x10 cm-es Dowex 50 x 2 oszlopra visszük és vízzel eluáljuk. 50 ml oldatot szedünk, ezt vákuumban 35 °C-on bepároljuk. A termék N-acetil-7-L-glutamil-taurin. Vízben oldjuk és pH 15 6,5-ös pufferben papírelektroforézissel tisztítjuk. Ciszteinsavra vonatkoztatott relatív mozgékonysága 1,22. Rf (n-butanol-piridin-jégecet-víz 20 15:10:3:12) = 0,25. 13. példa 25 25,4 ipg (0,1 mM) 7-L-glutamil-taurint benzoilezünk 13 pl benzoilkloriddal, az acetilezésnél (12. példa) leírt körülmények között. A Dowex-oszlopon végzett nátrium-ion mentesítés és az ezt követő bepárlás után kapott termék N-benzoil-7- 30 -L-glutamil-taurin, melyet pH 6,5-ös papírelektroforézissel tisztítunk. Ciszteinsavra vonatkoztatott relatív mozgékonyság: 1,06. Rf (n-butanol-piridin-jégecet-víz 35 15:10:3:12) = 0,47. 14. példa 40 100 mg a-L-glutamil-(7-taurin)-glicint — melyet a 15. példában leírtakkal analóg módon állítunk elő — feloldunk 25 ml pH 8,5-ös 0,2 mólos ammónium-hidrogén-karbonát pufferben. Hozzáadunk 1 mg karboxipeptidáz-A enzimet (Serva, 45 Heidelberg) 0,5 ml vízben oldva. Az elegyet 24 órán át termosztátban tartjuk 37 °C-on, majd liofilizáljuk. A száraz anyagban 7-L-glutamil-taurin és glidn mutatható ki. A 7-L-glutamil-taurint tiszta állapotban elektroforézis vagy Dowex-50 oszlopon 50 végzett kromatográfia útján lehet kinyerni. Fizikai állandói megegyeznek a 25. példában megadottal. 55 15. példa 1,083 g (2,2 mM) karbobenziloxi-L-glutaminsav-(a-benzil)-7-(p-nitrofenilésztert) feloldunk piridin és víz 2:1 arányú elegyében (6 ml). Hozzáadunk 60 278 mg (2 mM) homotaurint, majd 0,59 ml (4,2 mM) trietilamint. A sárga színű oldatot 72 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuumban bepároljuk. Az olajos maradékot vízben oldjuk, sósavval semlegesítjük és folyamatos extrak- 65 torban a p-nitrofenol eltávolítása céljából éténél 7
