173891. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antimicotikus hatású mikoheptin antibiotikum előállítására
7 173891 8 szójababliszt 1,5 súly% glükóz 5,0 súly% kukoricaliszt 2,0 súly% 5 ammóniumszulfát 0,4 súly% ámbráscet-zsír 1,0 súly% 10 kalciumkarbonát 0,25 súly% kukoricalekvár 0,25 súly% (szárazanyag súlya) 15 pH-érték a sterilizálás előtt 8,5. A sterilizálást 122-124 °C hőmérsékleten 30 20 percen át végezzük. A táptalaj térfogata 50 1. A fermentációt 28—30 °C hőmérsékleten 120 órán át levegőztetéü (0,5-1,0 térfogat levegő/térfogat táptalaj) és erőteljes keverés mellett végezzük. A fermentlé aktivitása 1050 pg/ml. 25 A fermentáció befejeztével a fermentlevet leszűrjük. A fermentléhez 1% diatomaföldet illetve perlitet adunk, 30 percig elegyítjük, és préslevegővel nyomószűrőre vezetjük. A teljesen átlátszó szűrletet 30 gázleválasztóba vezetjük. Ha a szűrt fermentlé még tartalmaz micéliumot, ismételten szűrjük. A szűrés befejezése után a nyomószűrőn levő micéliumot 3 órán át levegőztetjük, majd eltávolítjuk, lemérjük, és analízisre mintát veszünk. A 35 nyers micélium sárgásbarna, kenőcsös anyag, nedvességtartalma 70-80%. A kémiai tisztítás megkezdéséig a micéliumot 4 °C-on tartjuk hűtőszekrényben. A micélium mikoheptin-tartalmát a következő- 40 képpen határozzuk meg: Az analízisre vett 1,0 g-os mintát először 20 ml, majd 2xl0ml, 2% kalciumkloridot és 10% diklórmetánt tartalmazó 65%-os izopropanollal extraháljuk. Az egyes extrakciókat vagy rázógépen végez- 45 zük 40 percig, vagy pedig homogenizátorban 5 percig. Az extraktumokat egyesítjük, szűrjük és metanollal 50 ml térfogatúra egészítjük ki. Spektrofotometriásán mérjük a metanollal hígított oldat optikai sűrűségét, és kiszámítjuk a micélium mikoheptin-tartalmát. Az antibiotikum elkülönítéséhez 5 kg olyan micéliumot alkalmazunk, mely 10000 Mg/g aktivitással rendelkezik. A micéliumot 2 súly% kalciumkloridot és 10 súly% diklórmetánt tartalmazó 80%-os vizes izopropanollal extraháljuk. A micélium súlyegységére 5 térfogatrész extrahálószert veszünk. Az extraktumot 60 °C alatti hőmérsékleten 10—20 Hgmm nyomáson bepároljuk, a maradékot lehűtjük, és 2 térfogatrész vízzel hígítjuk. A kivált csapadékot elkülönítjük 50%-os vizes izopropanollal, majd pedig acetonnal mossuk, és vákuumban szárítjuk. A száraz antibiotikum minden súlyrészét 20 térfogatrész dimetilformamidban oldjuk, az oldhatatlan szennyezéseket elkülönítjük és az oldatból az antibiotikumot vízzel kicsapjuk. A kicsapáshoz a dimetilformamiddal azonos mennyiségű vizet használunk. A kivált kenőcsös anyagot 0,5 súly% nátrium-hexametafoszfátot tartalmazó 40%-os vizes n-propanollal, majd vízzel és acetonnal mossuk, és vákuumban szárítjuk. 15,4 g végterméket kapunk, amely 650 pg/mg mikoheptint tartalmaz, azaz 65%-os tisztaságú. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás antimikotikus hatású mikoheptin antibiotikum előállítására Streptoverticillium mycoheptinicum termelő törzs nitrogén- és szénforrásokat, valamint ásványi sókat tartalmazó táptalajon való tenyésztése, majd a fermentléből a micélium leválasztása és abból a végtermék elkülönítése útján, azzal jellemezve, hogy termelő törzsként az össz-Szövetségi Antibiotikum Kutató Intézetben 1973. június 27-én 1514 számon deponált Streptoverticillium mycoheptinicum 440 törzset alkalmazunk, és 2 végterméket ismert módon elkülönítjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy táptalajként 1,5 súly% szójabablisztet, 5,0 súly% glükózt, 2,0 súly% kukoricalisztet, 0,4 súly% ammóniumszulfátot, 1,0 súly% ámbráscet-zsírt, 0,25 súly% kalciumkarbonátot és szárazanyagra számítva 0,25 súly% kukoricalekvárt tartalmazó táptalajt alkalmazunk, melynek pH-értékét 8,5-re állítjuk be. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 794381 - Zrínyi Nyomda, Budapest
