173825. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nagytisztaságú béta-ciklodextrin gazdaságos ipari előállítására
7 173825 8 tása 220 cP. A hidrolizátumból 3 x 100 ml-es mintákat veszünk. A minták pH-ját 10 súlyszázalékos sósav-oldat adagolásával — ha szükséges ,— 6,8-re állítjuk. Az így nyert A, B és C jelű kukoricakeményítő degradátumhoz ciklodextrin-glükoziltranszferáz koncentrátumból a kukoricakeményítő grammjaira vonatkoztatott 2—10 THE mennyiséget adunk. A konverzió folyamán képződött ciklodextrinek lecsapása céljából, mindhárom elegyhez 5 térfogatszázalék toluolt adunk, és az így nyert A, B és C jelű konverzióelegyet kevertetve 5 45 °C-on inkubáljuk. 3 és 5 napos korban meghatározzuk a konverzióelegy 0-ciklodextrin-tartalmát, amit a következő táblázat mutat: Kukorica keményítő Enzimszubsztrát 0-ciklodextrin Minta koncentarány ráció THE/g vegyes % konverziófok vegyes % keményítő 3 nap 5 nap 3 nap 5 nap A 38 2 7,5 15,4 0,20 0,40 B 38 4 18,5 23,2 0,49 0,61 C 38 10 16,3 13,6 0,43 0,36 A ß-ciklodextrin mennyiségét a következőképpen határoztuk meg: 5 ml konverzióelegyet 10 ml desztillált vízzel hígítunk, majd centrifugáljuk. A 25 zömmel glükózt, maltózt, maito-oligoszacharidókat és kevés a- illetve y-ciklodextrint tartalmazó felülúszót elöntjük, majd a kiülepedett keményítőt és 0-ciklodextrin-toluol zárványkomplex kristályokat tartalmazó csapadékból a ciklodextrint jól 30 oldódó dimetilszulfoxid zárványkomplex alakjában extraháljuk 25 ml dimetilszulfoxid-etanol 1 :2 arányú oldószerelegy segítségével. Az oldhatatlan amilóz-etanol komplexeket kicentrifugáljuk és a felülúszóból a (3-ciklodextrin-tartalmat, mint ossz- 35 -szénhidrátot határozzuk meg fenol-kénsav módszerrel (Anal. Chem., 28, 350, 1956.). 2. példa 40 Az 1. példa szerint készült 100 ml konverzióelegyet vízgőz desztillációval 90-95 °C-on (560—650 torr) 1 óráig toluolmentesítjük. A toluolmentes konverzióelegyet porlasztva szárító készü- 45 léken (Niro-atomizer dán gyártmány) 190°C-os bemenő és 105-110 °C-os elmenő hőmérsékletek tartása mellett szárítjuk. Ily módon egy porleválasztó ciklont használva 20 g por-terméket kapunk, melynek összciklodextrin tartalma 55—65%, 0-ciklodextrin-tartalma 33—36%. Redukálóképessége 2—4 dextróz-ekvivalens, oldhatatlan amilóz határdextrin és amilopektin-határdextrin tartalma 17,5%. 3. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el, de sorban csak a 3 db 100 ml-es D, E, F jelű mintákhoz, a kukoricakeményítő 1 grammjára számolt 4 THE aktivitásnyi ciklodextrin-glükoziltranszferáz enzimkoncentrátumot adunk. Ezután a D, E és F mintákhoz sorban 5 térfogatszázalék toluolt, p-cimolt, illetve n-dekanolt adunk. A konverziót 5 napon át folytatjuk. A 3 és 5 napos mintákban az összciklodextrin tartalmat és a ciklodextrinek minőségi összetételét vizsgáljuk. Eredményeinket a következő táblázat tartalmazza: Minta Kukoricakeményítő koncentráció vegyes % Enzim-szubsztrát arány THE/g keményítő Lecsapószer D 38 4 toluol E 38 4 p-cimol F 38 4 n-dekanol Az összciklodextrin tartalmat oly módon határozzuk meg, hogy az adott térfogatú aliquot mintához 5 térfogatszázalék triklóretilént adagolunk, az elegyet 5 percig 15-18 000 fordulat/perc mixerben homogenizáljuk, majd a lecsapott ciklodextrineket 1 éjszakás, 5°C-on történő állás után összciklodextrin tartalom vegyes % hozam % 3 nap 5 nap 3 nap 5 nap 18,4 24,3 59,2 78,2 16,8 17,4 54,2 56,1 10,0 15,6 32,5 50,1 60 gravimetriás üvegszűrőn leszűrjük, szárítjuk és a súlyt analitikai pontossággal meghatározzuk. A kapott értékek ciklodextrin-triklóretilén komplexre vonatkoznak. A konverzióelegy ciklodextrin megoszlásának 65 vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálata: 4
