173783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nonapeptidaminok előállítására
11 173783 12 Elemzési eredmények C31H50O8N9 • 0 5 H20 összegképlet alapján: számított: C = 54,28%, H = 7,50%, N = 18,38%, talált: C = 54,32%, H = 7,32%, N = 17,97%. b) BOC-Tyr(Bzl)-a-Aibu-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása 3 ml 25%-os, jégecettel készített hidrogénbromid-oldatban feloldunk 423 mg Z-a-Aibu-Leu■Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-t, és az elegyet szobahőmérsékleten 40 percen át keverjük, majd hozzáadunk 50 ml száraz étert. A keletkező csapadékot szűréssel kinyerjük, és exszikkátorban csökkentett nyomáson, nátriumhidroxid felett szárítjuk. A kapott port 3 ml dimetilformamidban feloldjuk, az oldatot 0,24 ml N-etilmorfolinnal semlegesítjük, és 0 °C-ra hűtjük. Ezután az oldathoz hozzáadunk 557 mg BOC-Tyr(Bzl)-OH-t és 298 mg HONB-t, majd 280 mg DCC-t. Az elegyet 6 napon át keverjük szobahőmérsékleten. Ezután a diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, és a dimetilformamidot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot 100 ml kloroformban feloldjuk, n sósavval és 4%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk, vízzel öblítjük és vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, majd csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot etilacetátból kristályosítjuk. Hozam: 275 mg cím szerinti vegyület, olvadáspont: 127-129 °C, [a]p4=-27,6° (c = 0,54, dimetilformamidban), Rf1 = 0,60. Elemzési eredmények C44H670i 0Ni 0 • H20 összegképlet alapján: számított: C = 57,82%, H =7,61%, N = 15,32%, talált: C = 58,32%, H=7,51%, N = 15,10%. c) BOC-Ser-Tyr(Bzl-a-Aibu-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 3 ml, 0,1 ml anizolt tartalmazó trifluorecetsavban feloldunk 250 mg BOC-Tyr(Bzl)-a-Aibu-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-t, és az oldatot 30 percen át keverjük szobahőmérsékleten. Ezután hozzáadunk 30 ml száraz étert, és a keletkező csapadékot szűréssel kinyerjük és szárítjuk. A kapott port 5 ml dimetilformamidban feloldjuk, és az oldatot 0,08 ml N-etilmorfolinnal semlegesítjük. Ezután hozzáadunk 150 mg BOC-Ser-triklórfenilésztert, és az oldatot 2 napon át keverjük. Ezután a dimetilformamidot ledesztilláljuk, és a maradékot éterrel kezeljük, így por alakú terméket kapunk. Azt szűréssel kinyerjük, és etilacetátból kétszer bepárlással lecsapjuk. Hozam: 100 mg cím szerinti vegyület, olvadáspont: 140—142 °C (bomlás), [a]nS=-34,8° (c = 0,44, dimetilformamidban), Rf - 0,74. Elemzési eredmények C47H72O12NH *3H20 összegképletre: számított: C = 54,43%, H = 7,58%, N = 14,84%, talált: C = 54,66%, H = 7,45%, N = 14,91%. d) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-a Aib u-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása 3 ml, 0,1 ml anizolt tartalmazó trifiuorecetsavban feloldunk 77 mg BOC-Ser-Tyr(Bzl)-a-Aibu Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-t és az oldatot 30 percen át keverjük szobahőmérsékleten. Ezután hozzáadunk 30 ml száraz étert, a keletkező csapadékot szűréssel kinyerjük és szárítjuk. A kapott port 3 ml dimetilformamidban feloldjuk, és az oldatot 0,21 ml 10%-os, dimetilformamiddal készített N-etilmorfolinoldattal semlegesítjük. Ehhez hozzáadunk 37 mg kristályos (Pyr)Glu-His-Trp-OH-t, az elegyet -10 °C-ra hűtjük, majd hozzáadunk 21 mg HNOB-t és 3p mg DCC-t. Az elegyet 12 órán át 0 °C-on keverjük. A diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, és a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 20%-os etanolban feloldjuk, 10 cm hosszú, 1 cm átmérőjű Amberlite XAD-2 oszlopon adszorbeáljuk. Az eluálást gradiens módszerrel végezzükabszolút etanollal (mindegyik 200 ml). Azokat a frakciókat, amelyek a kívánt termékben gazdagok és az etanol 40—70%-os koncentráció tartományának felelnek meg, összegyűjtjük, csökkentett nyomáson betöményítjük és liofilizáljuk. A leírt módon 30 mg védett nonapeptidet kapunk (Rf2=0,31). 0,1 ml anizol és 0,1 ml merkaptoetanol hozzáadásával ezt a védett nonapeptidet 3 ml vízmentes hidrogénfluoriddal kezeljük, és az elegyet 60 percen át keverjük 0 °C-on. Ezután a hidrogénfluoridot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, és a maradékot feloldjuk 10 ml vízben. Az oldatot 2 ml éterrel háromszor extraháljuk, a vizes fázisokat összegyűjtjük és acetát alakban levő 4 cm hosszú és 2 cm átmérőjű Amberlite CG—410 oszlopon futtatjuk, és vízzel mossuk. Az elfolyó oldatot és a vizes mosófolyadékokat összegyűjtjük és az 1. példa szerinti módon átvezetjük egy karboximetil-cellulóz oszlopon és egy Amberlite XAD-2 oszlopon. Liofilizálás után 14 mg cím szerinti terméket kapunk fehérszínű pelyhes por alakjában. [a|p7=—54,1° (c = 0,31,5%-os vizes ecetsavban), Rf - 0,099, Rf3= 0,715. Aminosav analízis (6 n sósavval végzett hidrolízis tioglikolsav jelenlétében): His 0,94, Arg 0,97, Trp 0,81, Ser 1,06, Glu 0,97, Pro 0,97, Leu 1,03, Tar 1,03 a-Aibu 1,00. 3. példa (Pyr)Glu-His-Tpr-Ser-Phe-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása a) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-OH előállítása 100 ml metanolban feloldunk 4,0 g Z-Ser-Phe-OMe-t és atmoszférikus nyomáson 1,5 órán át redukáljuk katalizátorként 500 mg palládiumszivacsot használva. Ezután a katalizátort szűréssel 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
