173703. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oxitetraciklin előállítására
9 173703 10 34 órán át rázattuk. Ekkor a tenyészet 50-55%-os fragmentációt ért el. Az 50—55%-ban fragmentait tenyészet 5—5 ml-ét 100 ml térfogatú, 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban elkészített R-ll jelű tápfolyadékba oltottuk. A beoltott tenyészeteket 28°C-on, sík rázóasztalon - melynek kilengési diametere 32 mm volt - 70 órán át rázattuk. Ekkor a tenyészetek 100%-os fragmentációt értek el. A leírt módon mélykultúrában készített tenyészeteket —10°C-on lefagyasztottuk és felhasználásukig ezen a hőmérsékleten tároltuk. A leírt módon mélykultúrában készített tenyészetek csírázó- és növekedő képessége nem éri el az 1. példában leírt oltóanyagokét, így ezek oltóanyagként nem használhatók. A leírt módon mélykultúrában készített tenyészetekből (felolvasztás után) 1 ml-t 3% Tween—80-at tartalmazó desztillált vízzel 10 000-szeresre hígítottunk. A hígításból 2—2 ml-t Blacke üvegben elkészített R—1 jelű, alábbi összetételű spóráztató táptalajra oltottunk: R—1 jelű táptalaj összetétele: Keményítő 1,5% Kukoricalekvár (50%-os) 2,0% (Di)ammónium-szulfát 0,4% Kálium-dihidrogén-foszfát 0,2% Kalcium-karbonát 0,3% Agár 2,0% pH sterilezés előtt: 7,0 A beoltott tenyészeteket 28°C-on 7 napig inkubáltuk. Ekkor kékes-szürkén spórásodott az R—1 jelű spóráztató táptalajon megjelenő monokultúrák 85%-a, míg fehéren spórásodott a monokultúrák 15%-a. A fehéren spórásodott ráncos telepek hátlapján vízben oldódó fekete pigment volt megfigyelhető. A spórás monokultúrákat kémcsövekben elkészített R—1 jelű táptalajra izoláltuk (1 monokultúrából 6 db ferde-agar tenyészet), majd 28°C-on 7 napig inkubáltuk. A spórás ferde-agar tenyészeteket rázott szintű tenyésztéssel — TI—21 és TF—25 táptalajon - minősítettük. Megfigyeléseink szerint a kékes-szürkén spórásodott monokultúrák termelőképessége minden esetben alatta maradt a fehéren spórásodott monokultúrákénak. Átlagosan 101 db olyan monokultúra jutott 100 db levizsgált monokultúrára, melynek termelőképessége az 1. példában leírt módon készített oltóanyagokéval azonos szintet mutatott és amelyekből üzemi oltóspórát közvetlenül lehet készíteni. A magas termelőképességű monokultúrából 1 éve készített liofilizált spórakonzervből a példában leírt módon készült, oltóanyagkészítésre alkalmasnak talált ferde-agar alaptenyészet egyik kémcsövének spóráiból az 1. példában leírt módon mélykultúrás tenyésztéssel R—12 és R—11 jelű tápfolyadékban készítettünk oltóanyagot. A leírt módon mélykultúrában készített oltóanyagokat mind rázott, mind üzemi szintű tenyésztéssel — TI—21 és TF—25 táptalajon — minősítettük. Az oltóanyagok rázott szintű termelőképessége 120 órás rázott fermentáció esetén 6,95g/liter oxitetraciklin volt. Ez a kiindulási monokultúra eredeti termelőképességének 69,5%-a. Az oltóanyagok üzemi szintű termelőképessége 115 órás fermentációk esetében 7,0kg/m3 oxitetraciklin és az e fermentléből az 1. példában leírt módon kinyert komplex só vízmentes oxitetraciklin bázis tartalma 3,7 kg/m3 volt. 4. példa A magas termelőképességű monokultúrából 1 éve készített liofilizált spórakonzervből a 3. példában leírt módon készült, oltóanyagkészítésre alkalmasnak talált ferde-agar alaptenyészet egyik kémcsövének spóráiból a 2. példában leírt módon készítettünk kölesen oltóanyagot. A spórásodás átlagos időigénye 33 nap volt. A leírt módon kölesen készített oltóanyagokat mind rázott, mind üzemi szintű tenyésztéssel — TI—21 és TF—25 tápfolyadékban - minősítettük. Az oltóanyagok rázott szintű termelőképessége 120 órás rázott fermentációk esetén 6,3 g/liter oxitetraciklin volt. Ez a kiindulási monokultúra eredeti termelőképességének 63%-a. Az oltóanyagok üzemi szintű termelőképessége 115 órás fermentációk esetében 6 kg/m3 oxitetraciklin és az e fermentléből az 1. példában leírt módon kinyert komplex só vízmentes oxitetraciklin bázis tartalma 3,3 kg/m3 volt. 5. példa A magas termelőképességű monokultúrából 1 éve készített liofilizált spórakonzerv spóráit 0,3 ml Tween—80-at tartalmazó 10 ml desztillált vízben szuszpendáltuk, a kapott spóraszuszpenzió 5 ml-ét 100 ml térfogatú, 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban elkészített R-12 jelű tápfolyadékba oltottuk. A beoltott inokulumot 28°C-on, sík rázóasztalon - melynek kilengési diametere 32 mm volt - 34 órán rázattuk. Ekkor a tenyészet 50-55% fragmentációt ért el. Az 50-55%-ban fragmentált tenyészet 5—5 ml-eit 100 ml térfogatú, 500 ml-es Erlenmeyer•lombikban elkészített olyan R-ll jelű tápfolyadékba oltottuk, amely 4 x 10"3 g akriflavint is tartalmazott. A beoltott tenyészeteket 28°C-on, sík rázóasztalon — melynek kilengési diametere 32 mm volt - 70 órán át rázattuk. Ekkor a tenyészetek 1 -3%-os fragmentációt értek el. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
