173662. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ovulációt serkentő új nonapeptidamid-származékok előállítására
23 173662 24 ir.ajd a kapott oldatot 3 cm átmérőjű és 20 cm hosszú, szüikagélből készült és ugyanezzel az oldószereleggyel előkészített oszlopra felvisszük. Az oszlopot ugyanezzel az oldószereleggyel eluáljuk. Szilikagélen metanol és kloroform 15:85 arányú elegyével mint futtatószerrel végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatban 0,4 Rf-értéket mutató frakciókat elegyítjük, majd csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A kapott maradékot etil-acetáttal eldörzsöljük és az így képződött por alakú csapadékot kiszűrjük. 240 mg port kapunk. A port ezután feloldjuk 5 ml, 0,05 ml tioglikolsavat és 0,2 ml anizolt tartalmazó hidrogén-fluoridban, majd a kapott oldatot 0 °C-on 1 órán át keverjük. A hidrogén-fluoridot ezután elpárologtatjuk, majd a maradékot 10 ml vízben feloldjuk. A vizes oldatot 1 cm átmérőjű és 10 cm hosszú, Amberlite IRA-410 (acetát formájú) gyantából készült oszlopon átbocsátjuk. Az így kapott eluátumot úgy tisztítjuk, hogy először kétszer átbocsátjuk Amberlite XAD-2 gyantából készült oszlopon (2 cm átmérőjű és 10 cm hosszú), majd kétszer karboximetil-cellulózból készült oszlopon (1,9 cm átmérőjű és 25 cm hosszú) és végül egyszer Cephadex LH-20 gyantából készült oszlopon (1 cm átmérőjű és 60 cm hosszú). Az így tisztított eluátumot végül liofilizáljuk, amikor is 42 mg pelyhes csapadékot kapunk cím szerinti vegyületként. Rf‘ = 0,071, Rf2= 0,37. Aminosav-elemzés (hidrolízis sósavval tioglikolsav jelenlétében): Glu = l,01, His = 0,93, Trp = 0,92, Ser = 0,99, Phe=l,00, Alá =1,03, De = 0,98, Arg = 1,00, Pro = 1,08, etil-amin = 1,04 (88%os átlagos visszanyerés). 8. példa (Pyr)-Glu-Tyr-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása (a) BOC-Tyr-(OBzl)-(D)-Ala-OBzl előállítása 100 ml acetonitrilben feloldunk 11,1 g BOC-Tyr-(OBzl)-OH-t és 10,9 g H-(D)-Ala-OBzl-p-toluol-szulfonátot. A kapott oldatot ezután 0 °C-ra lehűtjük, majd egymás után 6,8 g DCC-t, 4,5 g HONB-t és 1,34 ml trietil-amint adunk hozzá. A reakcióelegyet -*zt követően szobahőmérsékleten 10 órán át keverjük, majd a kicsapódott karbamid-származékot kiszűrjük. A szűrletet bepároljuk, majd a maradékot 200 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az extraktumot egymás után 5%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonátoldattal, 0,1 n sósavoldattal és vízzel mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Az etil-acetátot ezután ledesztilláljuk, majd a maradékot először petroléterből kristályosítjuk, ezt követően pedig etil-acetát és petroléter elegyéből átkristályosítjuk. így 13,5 g mennyisében a 113—114 °C olvadispontú dm szerinti vegyületet kapjuk. Fajlagos forgatóképessé [a]“ = +18,4° (c = l, metanolban). Rf4= 0,76. Elemzési eredmények a C3iH3606N2 képlet alapján: számított: C = 69,90%, H =6,81%, N = 5,26%, talált: C =69,72%, H =6,75%, N = 5,42%. (b) BOC-Ser-Tyr-(OBzlHD)-Ala-OBzl előállítása 100 ml trifluor-ecetsavban feloldunk 11 g BOC-Tyr(OBzl)-(D)-Ala-OBzl-t, majd a kapott oldatot szobahőmérsékleten állni hagyjuk 30 percen át, ezután pedig csökkentett nyomáson az oldószert ledesztilláljuk. A kapott maradékot exszikkátorban nátrium-hidroxid felett csökkentett nyomáson szárítjuk. Ugyanakkor 50 ml tetrahidrofuránban feloldunk 4,1 g BOC-Ser-t és 4,0 g 2,4-dinitro-fenolt, majd a kapott oldatot 0 °C-ra lehűtjük, és 4,5 g DCC beadagolása után ugyanezen a hőmérsékleten 2 órán át keverjük. A kicsapódott diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, majd a szűrletben az előzetesen elkészített amin komponenst [H-Tyr(OBzl)-(D)-Ala-OBzl] feloldjuk. Az így kapott oldatot ezután 0 cC-ra lehűtjük, majd cseppenként 4,2 ml trietil-amint adunk hozzá. A reakcióelegyet ezt követően szobahőmérsékleten 5 órán át keverjük, majd a tetrahidrofuránt csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot 200 ml etil-acetátban feloldjuk, a kapott oldatot pedig egymás után 5%os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, 0,1 n sósavoldattal és vízzel mossuk, majd nátrium-szulfát felett szárítjuk. Az etil-acetátot ezután ledesztilláljuk, majd a maradékot először petroléterből kristályosítjuk, majd pedig etil-acetát és petroléter elegyéből átkristályosítjuk. így 9,7 g mennyisében a 124—125 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk. Fajlagos forgatóképessé [a]o1 = -4,1° (c=l, metanolban). Rf4= 0,57. Elemzési eredmények a C^H^OgNs képlet alapján: számított: C =65,89%, H = 6,67%, N = 6,78%, talált: C = 65,82%, H = 6,59%, N = 6,50%. (c) BOC-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02>-Pto-NH-CH2-CH3 előállítása 100 ml metanolban feloldunk 2,16 g BOC-Ser-Tyr-(OBzl)-(D)-Ala-OBzl-t, majd az így kapott oldatot 200 mg palládiumkorom jelenlétében 4 órán át katalitikus redukciónak vetjük alá, ezután pedig a katalizátort kiszűrjük. A szűrletből a metanolt ledesztilláljuk, majd a maradékot feloldjuk 10 ml dimetil-formamidban. Az így kapott oldatban ezután feloldunk 1,6 g H-Leu-Arg(N02>Pro-NH-CH2 -CH3 -t és 690 mg HONB-t, majd az oldatot 0 C-ra lehűtjük és keverés közben 795 mg DCC-t 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 12
