173662. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ovulációt serkentő új nonapeptidamid-származékok előállítására
17 173662 18 (b) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH(CH3 )2 előállítása Pontosan a 2. példa (b) lépésében ismertetett 5 módon állítjuk elő a cím szerinti vegyületet a fenti (a) lépésben kapott termékből és (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH-ból kiindulva, 128 mg terméket kapunk. Fajlagos forgatóképesség [a]£,s=-47,5° (c = 0,5, 10 5%-os vizes ecetsavban). Rf2= 0,375, Rf‘= 0,08. Aminosav-elemzés (hidrolízis 5,7 normál sósavoldattal tioglikolsav jelenlétében): H is = 0,99, Arg = 0,98, Trp = 0,89, Ser =0,94, Glu=l,00, 15 Pro =1,00, Alá =1,00, Leu =1,02, Tyr =0,98 (86,5%-os átlagos visszanyerés). 5. példa (Pyr(Glu-His-Trp-Ser-Phe-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3 előállítása (a) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-OH előállítása 100 ml metanolban feloldunk 4,0 g Z-Ser-Phe-OMe-t, majd a kapott oldatot katalitikus redukciónak vetjük alá 500 mg palládiumkorom jelenlé- 30 tében atmoszférikus nyomáson 1,5 órán át. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd azonnal a metanolt a szűrletből eltávolítjuk csökkentett nyomáson végzett desztilláció útján, és a kapott maradékot 25 ml dimetil-formamidban feloldjuk. 35 Az így kapott oldathoz ezután 4,1 g (Pyr)Glu-His-Trp-OH-t, majd —5 °C-on 3,8 g HONB-t és 3 g DCC-t adunk. A reakcióelegyet -5 °C-on 2 órán át, 0 °Con 2 órán át és szobahőmérsékleten 8 órán át keverjük. 40 A képződő diciklohexil-karbamidot ezt követően kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A kapott maradékot etil-acetáttal eldörzsöljük és a képződött port kiszűrjük. Hozam: 6,7 g. A port ezután metanol és kloroform 15:85 45 arányú elegyéből 30 ml-ben feloldjuk, majd a kapott oldatot 6 cm átmérőjű és 12 cm magas, szilikagélből készült és az említett oldószereleggyel előkészített oszlopra felvisszük. Az oszlopot az előzőekben említett oldószerelegyből 600 ml-rel, 50 metanol és kloroform 25:75 arányú elegyéből 1 literrel és metanol és kloroform 30 : 70 arányú elegyéből 1 literrel eluáljuk. A metanol és kloroform 25 :75 arányú elegyéből 400 ml és a metanol és kloroform 30 : 70 arányú elegyéből 55 700 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot etilacetáttal eldörzsöljük, és a képződött port kiszűrjük, amikor is 4,2 g mennyiségben (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-OMe-t kapunk. 60 Rf1 = 0,29. A fenti termékből 3,5 g-ot 20 ml metanolban szuszpendálunk, majd a szuszpenziót 0 °C-ra lehűtjük és 8 ml n nátrium-hidroxid-oldatot adunk hozzá. A reakcióelegyet ezután 1 órán át keverjük, 65 majd 8 ml n sósavoldattal semlegesítjük. Ezt követően a metanolt csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd a maradékhoz hideg vizet adunk. A képződött csapadékot kiszűrjük, hideg vízzel mossuk és szárítjuk, amikor is a cím szerinti vegyületet kapjuk. A termék Rf2 értéke = 0,61. Fajlagos forgatóképesség [a]p6,s =-3,3° (c = 0,55, jégecetben). (b) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-(D)-Ala-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása Hidrogén-bromid jégecettel készült 25%-os oldatából 15 ml-ben feloldunk 1,6 g Z-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-t, majd a kapott oldatot szobahőmérsékleten 50 percen át keverjük. Az oldathoz ezután 150 ml vízmentes étert adunk, 20 majd a képződött csapadékot kiszűrjük, szárítjuk és 30 ml vízben feloldjuk. A kapott vizes oldatot 2,5 cm átmérőjű és 15 cm hosszú, Amberlite CG-410 (szabad bázis formájú) gyantából készült oszlopra felvisszük, majd az oszlopot metanol és 25 víz 30 :70 arányú elegyével alaposan átmossuk. Az eluátumot és a mosóoldatot elegyítjük, majd betöményítjük a metanol elpárologtatása útján. A kapott maradékot liofilizáljuk, amikor is 1,2 g mennyiségben H-(D)-Ala-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH■CH2-CH3-t kapunk. Rf‘= 0,21, Rf2= 0,64. A fenti vegyületből 225 mg-ot 5 ml dimetil-formamidban feloldunk, majd a kapott oldathoz először 280 mg (Pyr)-Glu-His-Trp-Ser-Phe-OH-t, majd 150 mg HONB-t adunk. A kapott elegyet —10°C-ra lehűtjük és 90 mg DCC-t adunk hozzá. A reakcióelegyet ezt követően -10 °C-on 2 órán át, 0 °C-on 4 órán át, végül pedig szobahőmérsékleten 12 órán át keverjük. Az elegyet ezután szűrjük a diciklohexil-karbamid elkülönítésére, majd a szűrlethez etil-acetátot adunk. A képződött csapadékot kiszűrjük, szárítjuk, ezután pedig melegítés közben etanol és víz 20:80 arányú elegyében feloldjuk. A kapott oldatot állni hagyjuk, amikor is finom kristályok válnak ki, amelyeket kiszűrünk. Hozam: 389 mg. Fajlagos forgatóképesség [a]£,6'5 = -43,6° (c = 0,ll, metanolban). Rf*= 0,22, Rf2=0,74. (c) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-(D)-Ala-Leu-Arg-Pío-NH-CH2 -CH3 előállítása (I) 10 ml 60%-os vizes hangyasavoldatban feloldunk a fenti (b) lépésben kapott vegyületből 150mg-t, majd a kapott oldathoz 300 mg ón(II)4dorid-monohidrátot adunk. A reakcióelegyet ezután 80—85 °C-on melegítjük 2,5 órán át, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 30 ml 80 °C hőmérsékletű vízzel extraháljuk, majd az extraktumot szűrjük. A szűrletet ezután 3 cm átmérőjű és 15 cm hosszú, Amberlite XAD-2 9
