173662. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ovulációt serkentő új nonapeptidamid-származékok előállítására
27 173662 28 átmérőjű és 19 cm hosszú, karboximetil-cellulózból készült oszlopra felvisszük. Az eluálást lineáris gradiens-módszerrel végezzük 280 ml 0,005 n ammónium-acetát oldatot és 280 ml 0,15 n ammónium-acetát oldatot használva. A llOml és 210ml közötti frakciókat elegyítjük, majd liofilizáljuk, amikor is 95 mg mennyiségben a kívánt vegyületet kapjuk. Rfl = 0,35. Fajlagos forgatóképesség [a]p4=—39,0° (c = 0,5, 5%-os ecetsavoldatban). Aminosav-elemzés (hidrolízis 5,7 n sósavoldattal 4% tioglikolsav jelenlétében 110°C-on): Arg = 1,07, Trp = 1,03, Ser =1,89, Giu=l,00, Pro = 1,00, Ala = 1,00, Leu = 1,00, Tyr = 2,00 és etil-amin = 1,05 (81%-os átlagos visszanyerés). 9. példa (Pyr)Glu-p-NH 2 -Phe-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása (a) BOC-p-N02-Phe-OH előállítása 40 ml 1 n vizes nátrium-hidroxid-oldat és 150 ml dimetil-foramamid elegyében feloldunk 6,3 g p-N02-Phe-OH-t és 13,3 g terc-butilpentaklórfenil-karbonátot. A kapott oldathoz 5 ml trietil-amint adunk, majd az oldatot szobahőmérsékleten 48 órán át állni hagyjuk. Az oldószert ezután ledesztilláljuk, majd a maradékot vízben feloldjuk és a vizes oldatot éterrel extraháljuk. A vizes fázis pH-ját citromsavval 3-ra beállítjuk, majd etil-acetáttal extraháljuk. Az extraktumot vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd az oldószert ledesztilláljuk. A maradékot petroléterrel eldörzsöljük és a képződött csapadékot kiszűrjük. A terméket ezután szilikagéllel töltött oszlopon kromatográfiásan tisztítjuk, a kívánt vegyületet tartalmazó frakciókat elegyítjük és bepároljuk. A maradékot éter és petroléter elegyáíől kristályosítjuk. így 3,8 g mennyiségben a 103-104 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk. Rf4=0,61. Fajlagos forgatóképesség [a]p4=-32,0° (c = 0,75, dimetil-formamidban). Elemzési alapján: eredmények a Ci4HlgOéN2 képlet számított: C =54,19%, N = 9,03%, H =5,85%, talált: C = 54,21%, N = 9,21%. H =5,86%, (b) BOC-p-NH2-Phe-OH előállítása 80 ml metanolban az előző lépésben kapott vegyületből 2,0 got feloldunk, majd a kapott oldatot 500 mg palládiumkorom jelenlétében szobahőmérsékleten 8 órán át hidrogénezzük. A katalizátort ezután kiszűrjük, majd a szűr létből az oldószert ledesztilláljuk. A maradékot petroléterrel eldörzsöljük és a képződött csapadékot kiszűrjük. Ezt azután etil-acetát és petroléter elegyéből átkristályosítjuk. így 1,5 g mennyiségben a 121 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk. Rf4= 0,40. Fajlagos forgatóképesség [á\^=-2^2° (c = l, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a Ci4H20O4N2 képlet alapján: számított: C =59,98%, H =7,19%, N = 9,99%, talált: C =59,47%, H=7,20%, N = 9,71. (c) BOC-p-NH2-Z-Phe előállítása 20 ml In vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldatban feloldunk az előző lépésben kapott vegyületből 1,5 got, majd élénk keverés és jeges hűtés közben az oldathoz 1,1 g benziloxikarbonil-kloridot adunk. A reakcióelegyet ezután 3 órán át állni hagyjuk, eközben még 30 ml vizet adunk hozzá. Ezt követően a reakcióelegy pH-ját 1 n sósavoldattal beállítjuk, majd a képződött olajos csapadékot etil-acetátba extraháljuk. Az etil-acetátos fázist elkülönítjük, vízzel mossuk és vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószert ezután ledesztilláljuk, majd a maradékot petroléterrel eldörzsöljük. Végül a nyers terméket éter és petroléter elegyéből átkristályosítjuk. így 1,84 g mennyiségben a 156—157 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk. Rf4= 0,67. Fajlagos forpt óképesség [ct]^4 = -3,34° (c = 0,7, dimetil-formamidban). Elemzési alapján: eredmények a C22H2606N2 képlet számított: C =63,75%, N = 6,76%, H =6,32%, talált: C =63,76%, N = 6,86%. H = 6,25%, (d) BOC-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 5 ml dimetil-formamidban feloldunk 466 mg H -Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 -t, majd a kapott oldathoz 370 mg BOC-Trp-ONB-t adunk. Az oldatot ezután szobahőmérsékleten 3 órán át állni hagyjuk, majd az oldószert ledesztilláljuk és a maradékhoz etil-acetátot adunk. A képződött port kiszűrjük, majd etil-acetátban forraljuk, az etil-acetátos elegyet lehűlni és állni hagyjuk. A képződött csapadékot kiszűrjük. így 590 mg mennyiségben a 189-190 °C olvadáspontú (bomlik) cím szerinti vegyületet kapjuk. Rf4= 0,32. Fajlagos forgatóképesség [ot]J,a=-43,8° (c = 0,6, dimetil-formamidban). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 14
