173643. lajstromszámú szabadalom • Eljárás allergiaellenes hatású pirimido-benzotiazolok előállítására
7 173643 8 A PC A-teszt valamely vegyület allergiaellenes (különösen asztmaellenes) hatásának a mértéke. Az olyan vegyületeket, amelyek meggátolják a humán immunoglobulin E (IgEjhnek, a reaginnak a patkányokban megtalálható megfelelője által kiváltott pozitív PCA-teszt kifejlődését, allergiaellenes hatásúaknak tekintjük [C. Mota, Ann. N.Y. Acad. Sei. LQ3, 264 (1963)}. A reagin elsődlegesen immunoglobulin E (IgE) és ez a fő immunoglobulin, amely felelős az allergiás asztma, anafilaxa, szénanátha, élelmiszertúlérzékenység és a gyógyszerérzékenység bizonyos megjelenési formái kialakulásáért, habár a legújabb szakirodalmi adatok szerint az antitestek IgG osztályának is jelentős szerepe van az allergiás betegségekben. Ha érzékenyített egyedeknek, állatoknak vagy embereknek ilyen anyagokat adunk be, még mielőtt érintkezésbe kerülnének az antigénekkel vagy olyan anyagokkal, amelyekre ezekazegyedek allergiásak, ezek az allergiaellenes vegyületek a nélkülük bekövetkező allergiás reakció kifejlődését meggátolják. így ezek a vegyületek alkalmasak arra, hogy a reagin által közvetített jellegű anafilaxiás reakciók vagy allergia ellen megelőző kezelést végezzünk velük. Más szóval ezek a vegyületek meggátolják, hogy az antigén-antitest (allergiás) reakcióból eredő közvetítő anyagok felszabaduljanak, amint ezt a humán reaginnek egy a patkányokban megtalálható megfelelőjét, a homocitotróp antitestet használó PCA-teszt szemlélteti. Patkányokon, a PCA-teszt kísérleti állatán a reagin által közvetített antigén-antitest-reakció gátlását úgy tekintjük, mint az embereknél az allergiás rohamok idején fellépő, reaginnel közvetített antigén-antitest-reakció gátlásának a megfelelőjét. A találmány szerinti vegyületek kiértékelésére használt PCA-teszt módszer kitűnő összefüggést mutat ezen vegyületeknek az ezen tesztben megnyilvánuló hatékonysága és az allergiás asztma kezelésére való alkalmazhatósága között. 170-210 g testsúlyú hím Charles River Wistar patkányokon mérjük a PC A reakciót befolyásoló anyagok hatékonyságát. Az IgE antitestekben dús reagines antiszériumot Petillo és munkatársai [Int. Arch. Allergy, 44, 309 (1973)] szerint állítjuk elő. Tyúktojás albuminra hiperimmun antiszériumot, amely IgG antitestekben gazdag, Orange és munkatársai [J. Exptl. Med. 127.767 (1968)] módszerével 5 állítunk elő. Az antigén beadása előtt 48 órával reagines antiszérumot fecskendezünk a normális patkány leborotvált hátbőrébe; az antigén beadása előtt 5 órával hasonlóan beadjuk a hiperimmun antiszérumot is. A bőr egy harmadik helyére 60 meg hisztamin-dihidro- 10 kloridot és 0,5 meg szerotonin-kreatinin-szulfátot adunk közvetlenül az antigén beadása előtt, így ellenőrizzük a gátlás antihisztaminos, antiszerotoninos vagy aspecifikus jellegét; ezután intravénásán beadjuk a találmány szerinti vegyületeket vagy fiziológiás sóolda- 15 tot, majd azonnal utána 5 mg tojásalbumint és 2,5 mg Evans-kék festékanyagot adunk be, sóoldatban feloldva. Orális adagolás esetén a vizsgálni kívánt vegyület beadását követően 5 perc múlva adjuk be az Evans-kék festékanyagot és a tojásalbumint. Fél óra múlva kloro- 20 form segítségével megfojtjuk az állalatokat, hátukról eltávolítjuk a bőrt, és kifordítva kiértékeljük. Minden injekciós hely annyi pontot kap, ahány mm a folt átmérője, és az elszíneződés mértékét az elszíneződéssel arányos szorzószámokkal (0,1; 0,5; 1; 2; 3 és 4) 25 vesszük figyelembe. Egy-egy 5 állatból álló csoportra összegezzük egy adott injekciós hely pontszámát, és ezt összehasonlítjuk a sóoldattal kezelt állatokéval. A különbséget a vizsgált vegyület által kiváltott százalékos gátlásként fejezzük ki. A fent leírt módszerrel mérjük a találmány szerinti jellemző vegyületek allergiaellenes hatását, és e hatás-értékeket mint az allergiaellenes védőhatás mértékét adjuk meg, százalékban. Összehasonlító anyagként egy, a kereskedelemben kapható allergiaellenes szert, az 35 Intalt használjuk. A vizsgált vegyületek általános képlete : I. Az orálisan, ill. intravénásán adagolt vegyületek hatását az I. és II. táblázatban adjuk meg. 40 I. táblázat Rt______ Rr 0,01 IgE, i.v., mg/kg IgG, i.v., mg/kg 0,03 0,1 0,3 3,0 0,01 0,03 0,1 0,3 3,0 ch3-ch3 80 34 ch3o-H-100 55 FH-53 41 Cl-H-78 100 23 84 ch3-H-90 60 ch3 och3o-100 85 c2 h5oc2h5o-100 87 HH-48 54 Intal 29 78 II. táblázat Rí r2 IgE. p 0,1 I.O., 1,0 mg/kg Ig3, p.o., mg/kg 3,0 0,1 1,0 3.0 ch3o-H-85 57 Cl-H-100 84 ch3o-CH30-79 45 HH-72 59 4
