173603. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-28086 jelű antibiotikumok előállítására
17 173603 18 vinil-protonnak megfeledő jelek pedig szintén eltolódnak. Ezek a jelenségek a III részképleteknek megfelelő változásokra jellemzőek, a III képletekben R 1—5 szénatomos alkilcsoportot jelent. A megadott részszerkezetek teljes egyezésben vannak a H1 homonukleáris szétkapcsolási kísérletek eredményeivel, és az acetil- és propionil-észter származékokkal kapott C13 mag mágneses bizonyítékokkal. Az A 28 086 antibiotikum-komplex A összetevőjének 2—6 szénatomos acil-észterei egy sor szerves oldószerben, így például metanolban, etanolban, dimetil-formamidban, dimetil-szulfoxidban, etil-acetátban, kloroformban, acetonban és benzolban oldódnak, de csak igen gyengén oldódnak nem poláros szerves oldószerekben, például hexánban, és egyáltalán nem vízben. Az A-28 086 D faktor acilészter-származékokat képez. Az észterezés és a hidroxilcsoporíok valamelyikén megy végbe, és valamely 2-6 szénatomos savanhidriddel vagy savkloriddal végezhető. Ilyen észtereket igen egyszerűen előállíthatunk például az A 28 086 D faktort, például a megfelelő savanliidriddel szobahőmérsékleten reagálratva. Ezek az acilszármazékok ugyancsak alkalmazhatók tápanyag-hasznosítás fokozására. Az A 28 086 D faktor acetilésztere fehér, szilárd anyag, molekulasúlya íömegspektrometriávai mérve 820, tapasztalati képlete C4ÉH760i2, az elemanalízis adatai szerint 67,32% szenet, 9,27% hidrogént és 23,41% oxigént tartalmaz. Az A 28 086 D acetilészíer kloroformban felvett infravörös spektrumában az alábbi hullámszámoknái találhatók abszorpciós maximumok: 3490 , 2970, 2935, 2880, 2860 (váll), 1745, 1725, 1565, 1470, 1385, 1330, 1295, 1255, 1190, 1155 (váll). 1130, 1115, 1100, 1060, 1040 (váll), 1020, 1000 , 970, 95C, 925 és 895 cm“1. Az A 28 086 D-n-butirilészter szilárd, fehér anyag, molekulasúlya tömegspektrometriával meghatározva 848, tapasztalati képlete C4gH80Oi 2, az elemanalízis adatai szerint 67,93 szenet, 9,43% hidrogént és 22,44% oxigént tartalmaz. Az A 28 086 D-n-butilészter kloroformban felvett infravörös abszorpciós spektrumában a következő hullámszámoknál találhatók abszorpciós maximumok: 3480 . 2970 , 2940 , 2880 , 2860 (váll), 1740. 1725. 1710 (váll), 1565, 1470, 1390, 1330, 1292. 1190, 1130, 1115, 1100, 1060, 1028,-1000, 970, 955 (váll), 920, 910 és 890 cm-1. Az A 28 086 D faktor acetil- és n-butirilészter-származékától szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiával választható elfuttatószerként etilacetátot használva. Előhíváshoz vanillin spray reagens használható (3%-os meíanolos vanillinoldat +0,5 ml tömény kénsav 100 ml oldata). Az A 28 086 D faktor és acetil- illetve n-butirilészter-származékai ebben a rendszerben a következő Rf-értékeket adják: A 28 086D O-29 A 28 086D acetilészter 0,54 A 28 086D n-butirilészter 0,61 Az A 28 086D faktor, valamint 2-6 szénatomos etilészterei ugyancsak képesek a sóképzésre. A találmány szerinti szarvasmarhatakarmányban alkalmazható például a megfelelő gyógyászatiig elfogadható alkálifém-, alkáliföldfém- és aminsók is. Az A 28 086 összes 2—6 szénatomos acil-észter-származékai sók és észterek képzésére alkalmas savas funkciós csoporttal rendelkeznek. A találmány szerinti eljárás értelmében az új antibiotikumok előállítására az A 28 086-ot termelő Streptomyces aurefaciens törzset süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között, előnyös összetételű táptalajon addig tenyésztjük, m(g jelentős mennyiségű antibiotikum halmozódik fel a táptalajban. Az antibiotikumok elkülönítésére általában ismert elkülönítési és tisztítási eljárásokat alkalmazunk. Az A 28 086 jelű antibiotikumok előállítására használt egyik új mikroorganizmust a törökországi Araráton gyűjtött földmintából izoláltuk. Ezt a mikroorganizmust a Streptomyces aureofaciens Duggar egyik törzsének határoztuk meg, amelyet Shirling és Gottlieb ír le a „Cooperative Description of Type Cultures of Streptomyces, III. Additional Species Descriptions from First and Second Studies”, Intern. Bull. Systematic Bacteriol. 18 , 279-392 (1968). A meghatározás az International Streptomyces Project [Shirling and Gottlieb, Methods for Characterization of Streptomyces species, Intern. Bull. Systematic Bacteriol., 16, 313—340 (1966)] követelményei szerint történt, kiegészítve további vizsgálatokkal. A színeket az ISCC-NBS-módszer (Kelly és Judd, The ISCC-NBS Method of Designating Color and a Dictionary of Color Names. Us. Dept, of Commerce, Circ. 553, 1955, Washington, D.C.) szerint neveztük el. A zárójelek közé tett jelek a Tresner és Backus féle színskála jelei [Tresner és Backus, System of Color Wheels for Streptomyces Taxonomy, Appl. Microbiol., 11, 335—338 (1963)], a színek megfelelő jeleit aláhúztuk. A Maerz és Paul szerinti színeket [Maerz és Paul, Dictionary of Color, McGraw-Hill Book Co., Inc., New York, N.Y. (1950)] szögletes zárójelek között adjuk meg. A tenyésztést 30°C hőmérsékleten végeztük 14 napon át, kivéve, ha másként adjuk meg. Az A 28 086 antibiotikumokat termelő NRRL 5758 törzs jellemzése Morfológia A spórázó légmicélium kampós, hurkos és nyitott spirálokat alkot. Morfológiailag jellemző a rectus flexibilis típus. A spórák rövidek, hengeres alakúak és 10—50 spóra láncokban áll. A spórák mérete 1,3/íx1,75/í, 1,3//-tói 1,95x1,3 // méretig. Felületük az elektromikroszkópos vizsgálat szerint sima. Az NRRL 5758 törzs tenyésztési tulajdonságai különböző táptalajokon. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
