173603. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-28086 jelű antibiotikumok előállítására
39 173603 40 A szénhidrát-hasznosítás fokozódását in vivo vizsgálattal további bizonyítékokkal támasztjuk alá, oly módon, hogy a bendőtartalom kivezetésére alkalmas kanüllel látjuk el az állatokat. 5 A 13. táblázatban megadott eredményekkel zárult kísérleteket kifejlett, egyenként körülbelül 455 kg súlyú, sipollyal ellátott ökrökkel végezzük. Két állatot közönséges táplálékkal, és a 4—4 állatból álló kísérleti csoportokat A28 086A-val 10 kiegészített táplálékkal etetünk. 100 ml bendőfolyadékhoz 100 ml *10%-os metafoszforsavat adunk. Ülepedni hagyjuk a mintákat, majd a felül úszó propionsav-koncentrációját gázkromatográfiásán határozzuk meg. A 13. táblázatban megadjuk a 15 14 napon át folytatott kísérlet ötnél több analízisből számított, a bendőfolyadék propionsav-14. tábla Tartalmának átlagos növekedését jelző adatokat. A kontrollok közelítőleg 20 mól9í propionsavat tártálma znak. 13. táblázat A 28 086 A A kontrolihoz viszonyított (mg/nap) százalékos növekedés 25 17,4 100 54,0 További in vivo kísérlettel bizonyítjuk, hogy az A 28 086-komplex A komponense növeli a juhok táplálék-hasznosítását. A kísérleteket 56 napon át végeztük, az eredményeket a 14. táblázatban adjuk meg. Átlagos napi Takarmány-A 28 086 A g/tonna takarmány Az állatok száma növekedés (g/nap) 9 13 199,6 18 13 172,4 Kontroll 17 190,5 i találmány szerinti eljárással előállított A 28 086 jelű antibiotikum-komplex D komponense vírusellenes hatású. A D jelű vegyület aktív a Maryland B vírussal, a polivírus (III-mal), a COE 35 vírussal, herpes vírussal és a Se miiki Forest vírussal szemben, ahogy azt a Siminoff által ismertetett [Applied Microbiology, 9(1) 66—72 (1961)] in vivo plakk-szupressziós vizsgálatok mutatják. Az A 28 086 D a hasonló szövet kultúrás vizsgálatok 40 szerint ugyancsak hatásos a transzmisszálható Gastro-enteritis vírussal, Newcastle Disease és a fertőző Bovine Rhinotracheitis vírussal szemben. Az a tény, hogy az A 28 086 D vegyületek hatásosak a vírusok és anaerob baktériumokkal 45 szemben, különösen alkalmassá teszi őket a csirkék, sertések, marhák és birkák enteritiszes megbetegedéseinek kezelésére vagy gátlására. Az A 28 086-komplex Djelű vegyületei a kérődzők entero-toxémiás megbetegedésének kezelésére 50 ugyancsak használhatók. A találmány szerinti eljárással előállított A 28 086 antibiotikum-komplex D összetevőinek fontos tulajdonsága, hogy coccidia-ellenes hatással rendelkeznek. In vivo kísérletek bizonyítják az 55 A 28 086 D Eimeria tenella elleni coccus-ellenes aktivitását. A kísérleteket az alábbiak szerint végezzük [részletesebben lásd McDougald és Galoway, Exper. Parasitology, 34, 189-196 (1973)]. 60 A kiindulási tenyészetet ismert módszerrel, Leighton-csöveket, műanyag csészéket vagy lemezeket, esetleg más alkalmas tenyésztőedényt használva állítjuk elő. 2-3 napon át megfelelő táptalajon (Eagle minimál táptalaj, laktalbumin- 65 felvétel Takarmány %-os nö(g/nap) növekedés vekedés 1492,3 7,40 12 1428,8 8,31 1 1614,8 8,38 _ ■hidrolizátum az Eagle- vagy a Hank-féle sóoldatban, 199. számú táptalaj stb.) való tenyésztést követően általában megfelelő, fertőzésre és gyógyszeres kezelésre alkalmas monoréteg fejlődik ki. Ezen kísérletekhez csirke vesesejtek elsődleges tenyészeteit használjuk. Az Eimeria tenella oocystáit a fertőzött csirkék ürülékéből különítjük el, majd felhasználás előtt tisztítjuk és sterilezzük őket. Az oocystákat szobahőmérsékleten, levegőztetés közbeni inkubációval spóráztatjuk, de eljárhatunk úgy, hogy rázóasztalon enyhéz rázatjuk őket, vagy más módon is. A baktériumok vagy gombák növekedését káliumbikromát vagy kénsav (vagy más vegyület) adagolásával gátolhatjuk a spóráztatás alatt. A fertőző sporozoitákat az oocysta mechanikus széttörésével és az ezt követő tripszines és epesavas sókkal való kezeléssel szabadítjuk ki, amikor a sporocistákból kiszabadulnak a szabad sporozoiták. A sejttenyészetek fertőzésére az élő sporozoitákat becseppentjük a tenyésztőtérbe. A vizsgálandó vegyületeket ekkor, vagy ezt követően adagoljuk. A vizsgálandó vegyületet megfelelő koncentrációban, 10%-os, fiziológiás sóoldattal készült dimetil-formamiddal adagoljuk. A kísérlet végét az aszexuális fejlődési szakaszok gátlása jelenti, ezt a fixált és festett, a fertőzéstől számítva 96 órás tenyészet mikroszkopikus vizsgálatával határozzuk meg. Az eredményeket a másodlagos szaporodási schizoutok jelenlététől vagy hiányától és a sejtréteg bármilyen látható toxikus elváltozásától függően aktív (A), inaktív (N) vagy citotoxikus (C) jelöléssel adjuk meg. 20
