173603. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-28086 jelű antibiotikumok előállítására
29 173603 30 tcnyésziéhez, közelítőleg 1 g/liter mennyiségben, így az A 28 086 antibiotikumok sóként, a micéliumma! együtt különülnek ei. A micéiiumról az antibiotikumokat előnyösen metanollal extraháijuk, de használhatunk más rövidszén'áncű 5 alkoholokat vagy ketonokat is. Az A 28 086 antibiotikumok elkülönítésére előnyösen azeotróp desztillációt is végezhetünk. Ekkor a vizes tenyészléhez a vízzel azeotrop io elegyet alkotó szerves oldószert adunk. Az oldószer-tenyészlé elegyet ezután azeotrop desztillálónak vetjük alá, eltávolítjuk a tenyészlébői a víz legalább felét, amiuián olyan víz-oldószer elegyet kapunk, amelynek szerves oldószer fázi- is sában vannak az A 28 086 antibiotikumok. Az oldhatatlan melléktermékek elkülönítésére például szűrjük vagy centrifugáljuk a szuszpenziót. A szerves oldószeres oldatból az A. 28 086 antibiotikumokat ismeri eljárásokkal, például az oldat 20 desztiilálásával, nem-oldószer adagolásával kiváltott csapadékképzéssel vagy ex+rakcióval különítjük el A fenti eljárás kivitelezéséhez, a. megfelelő vizes azeotróp elegy készítéséhez példáid butilaikohoit, 25 amihlkoholt, hexilalkoholt, benzilalkoholt, outil ■aeetátot, amil-acetátot, 1 ,2-dikJór-’tar.t, 3-pentanont, 2 hexánon*, benzolt, ciklchexanont, toluolt vagy xilolokat használunk 30 A nagyobb térfogatú fermentlevek feldolgozásakor különösen előnyös az azeotróp vesztillációs módszer. Az azeotróp elvből távozó -hz és oldószer ismert eljárásokkal egyarárd elkülöníthető, és további felhasználásra recirkuiaihntó. Az eitá^o- 35 látott víz szennveződé^ektői nen+es, nem igényéi további szennyezCs-meiite'ítíst. Az oldószer ismét íelhasználható a tolya^iathan. Az a 28 C8ó antibiotikumok további tisztítását ' ö továboi extiakciós és adszorpciós eljárással végezzük. Adszorpciói anyagként például s'ól’kagé'it, aktív szenet, Floroail®-t (magnézmrnszdikát, Floridin Co., P.O. Box 989, Tallahassee, F1*.) és hasonlókat haszná illatunk előnyösen A találmány szerinti eljárás egy következő előnyös foganatosítási változata szerint a táptalajösszetevőket és a micéliumct tartalmazó szilárd halmazállapotú anyagot használjuk az A 28 086 50 antibiotikumok forrásaként, előnyösen a víz eltávolítása után. így például úgy járunk cl, hogy a fermentáció befejezését követően fogyasztva szárítjuk a tenyészleveí. és közvetlenül ezt keverjük össze a takarmány-premix megfelelő mennyiségevei. 55 A találmány szerinti eljárás egy másik előnyös kivitelezési változata szerint úgy járunk el, hogy az A 28 086 antibiotikumot tartalmazó fermentléből elkülönítjük a micéliumot, amikor szárítás után a 60 takarmány-premixbe közvetlenül adagolható terméket lápunk. Ha a micéliumot ilyen célra különítjük el, 10 g/liter mennyiségű kalciumkarbonát szűrési segédanyagként való adagolása előnyösen befolyásolja a száraz termék minőségét. 65 Az ezideig megadott körülmények között az előzőekben leírt és NRRL 5758-nak és NRRL 8092-nek jelölt Streptomyces aureofaciens törzsek elsősorban A 28 086 A komponenst szintetizálnak. Bár az egyes összetevők aránya a tenyészlében függ a fermentációs körülményektől, az NRRL 5758 törzs 99% A-t, mig az NRRL 8092 törzs 90% A-t szintetizál az összes termelt antibiotikumra (aktivitás) vonatkoztatva. Az A 28 086 antibiotikum-komplex B összetevőjének aktivitása adja az NRRL 5758 által termelt antibiotikus aktivitás további részének közel 100%-át, a D összetevő minor komponensként van jelen. Ugyanakkor az NRRL 8092 törzs által termelt antibiotikus aktivitás 8—10%-át az A 28 086 D komponens adja, mig a B összetevő minor komponensként van jelen. Az A 28 086 antibiotikum-komplex A, B és D jelű összetevőit egymástól ismert eljárásokkal, például oszlopkromatografiával, vékonyrétegkromatográfiával és hasonlókkal választjuk el. így például, ha az A, B és C vegyületek elválasztását szilikagélbő! készült oszlopon választjuk el, az eluáiást például különböző oldószerelegyekkel, így például benzol és etil-acetát el egy ei vei végezzük. Ha a szibkagél oszlopról benzol és etil-acctáí old ószer eleggyel eiuáljuk az antibiotikumokat, úgy először a B, majd az A és D jelű vegyületek eluálódnak. Az elúcíó követésére, ahogy azt az előzőekben már megadtuk, előnyösen vékonyréíegkromaíográíiat végzünk. Az A 28 086 antibiotikumok az állati és növényi szervezetben paíogén baktériumainak és gombáinak növekedését gátolják. Az A 28 086 antibiotikumok relatív mikrobiológiai aktivitásait az 5. táblázatban adjuk meg. A vizsgálatokat az ismert korong-diffúziós módszerrel végeztük, ó mm es korongokat süllyesztünk milliliterenként 1 mg antibiotikumot tartalmazó oldatba, a korongokat a tesztorganizmussal Deohott agailcmezre helyezzük. 5.táblázat A gátlási zóna átmérője (mm) Tesztorganizmus----------------------------------------A 28 086 A A 28 086B Staphylococcus aureus 19 Bacillus subtilis ATCC 6633 28 Sarcina lutea ATCC 9341 26 Mycobacterium avium ATCC 7992 12 21 31 16 12 15
