173561. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás p-hidroxi-fenil-acetamido-penám-3-karbonsav-származékok előállítására
3 173561 4 mennyisége az egész oldat térfogatára számítva 10 mg/ml. A találmány szerinti enzimes hidrolízis kvantitatíve lejátszódik és egyszerűen kivitelezhető az enzimes reakcióknál szokásos alkalmazásával, különleges felszerelést nem igényel. A kapott terméket önmagában ismert módon különítjük el. A találmány szerinti eljárást az alábbi példák szemléltetik. A kiindulási vegyület előállítása: 15,27 g (0,071 mól) 6-amino-2,2-dimetil-penám-3-karbonsavat keverünk 500 ml vízmentes metilénkloridba. Ezt követően 120 ml metilénkloridot ledesztillálunk, majd 11,8 ml hexametildiszilazánt adunk hozzá. Az elegyet visszafolyató hűtő alkalmazásával keverés közben 20 óra hosszat forraljuk. (10—15 óra eltelte után a kiindulási vegyület oldatba megy). A kapott oldatot 0°C-ra lehűtjük, majd 120 ml metilénkloridot, ezt követően 9,5 ml dimetilanilint és 7 ml dimetilanilinhidrokloridnak metilénkloriddal készült oldatát adjuk hozzá. Ezt követően 20°C-on kis részletekben (mintegy fél óra alatt) 20 g (0,0756 mól) D-{—)-a-amino-a-(p-acetoxi-fenil)-acetilklorid-hidrokloridot adunk az oldathoz, majd az elegyet 5°C hőmérsékleten egy éjszakán át állni hagyjuk. Ezt követően az oldathoz 5 ml metanolt, majd 240 ml vizet adunk. A pH-t trietilamin segítségével 2,5-re állítjuk. Az elegyet Celit szűrőn átszűrjük. Az oldat pH-ját ismét ellenőrizzük, a vizes fázist elkülönítjük, kétszer 150 ml metilénkloriddal mossuk, majd aktív szénnel kezeljük. Az oldat pH-ját 4,5-re állítjuk, majd csökkentett nyomáson az oldat térfogatát 150 ml-re állítjuk be. Az így kapott szuszpenziót egy éjszakán át 5°Con állni hagyjuk, a keletkezett szilárd anyagot elkülönítjük, vízzel, majd acetonnal mossuk, 40°C-on szárítjuk. Az L-(+)-izomertől mentes 6-D-(—)-a-amino-a-(p-acetoxi-fenil-acetamido)-2,2-dimetil-penám-3-karbonsavat kapunk. Hozam: 30% (85-90% tisztaságú kiindulási termék esetén), aD = 205,5 (0,5% 0,1 n HC1). Analízis a trihidrátra számítva: számított: C =46,85%, H =5,83%, N = 9,10%, S = 6,93%, H2 O = 11,7%, talált: G =47,17%, H =5,72%, N = 9,02%, S =7,27%, H20 =11,33%. 1. példa 20 mg zsírmentesített búzakorpát (Shiloh Forms Inc.) 1,0 g 6-D-(-)-a-amino-a-(p-acetoxi-fenil-acetamido)-2,2-dimetil-penám-3-karbonsav (p-acetoxiampicillin) és 2 liter 0,01 mólos 7,0 pH-jű káliumfoszfát puffer oldatot elegyítünk. A kapott elegyet 28°C-on keverjük. Az elegyből óránként mintát veszünk, a kivett mintákat kromatográfiásan vizsgáljuk. A mintákból mintegy 5 mikrolitert 2- 3 cím széles Whatman 1. papírból készült csíkokra viszünk fel. A felvitt foltokat megszárítjuk, majd 80 rész butilacetátot, 15 rész n-butanolt, 40 rész ecetsavat és 24 rész vizet tartalmazó oldószer - eleggyel fejlesztjük ki. A papírcsíkokat Bacillus subtilist ATCC 6633 tartalmazó lemezeken (pH: 6,0) biológiai vizsgálatnak vetjük alá. A biokromatográfia segítségével végzett vizsgálat azt igazolja, hogy az átalakulás 3 óra alatt 100%-osan végbemegy. Az elegyet ezt követően centrifugáljuk. A felülúszó folyadékot elkülönítjük, a pH-értékét sósavval 4,0 értékre állítjuk, majd liofilizált terméket fentiek szerint újra vizsgáljuk. A vizsgálat eredménye azt mutatja, hogy a termék mintegy 900 mg p-hidroxiampicillint tartalmaz. A liofilizált termékből 6,0 g-ot 20 ml vízzel elegyítünk. A kapott elegy pH-ját 6 n sósav oldat segítségével fokozatosan 2,0 pH-ra állítjuk. Az elegyet 15 percig keverjük, majd a keletkező szilárd terméket szűréssel elkülönítjük. A szűrletet 1,0 g aktív szénnel kezeljük, szűrjük, majd a szűrlet pH-ját 4,5-értékre állítjuk. Az oldalfalat kapargatva megindítjuk a kristályosodást, amely mintegy 1 óra alatt befejeződik. A kristályokat szűréssel elkülönítjük, vízzel, majd acetonnal mossuk, és szárítjuk. 180 mg 6-D-(—)-a-amino-a-(p-hidroxi-fenil-acetamido)-2,2-dimetil-penám-3-karbonsav-trihidrátot kapunk. Bomláspont: 201 °C. Analízis: a Ci6Hi9N305S képletre számított: C =45,82%, H = 6,01%, N = 10,02%, H20 = 12,89%, talált: C =45,87%, H = 5,71%, N = 10,48%, H20 = 13,68%. 2. példa A vizsgálathoz az alábbi reakcióelegyeket állítjuk elő, amelyeket 28°C-on rázunk, majd 0, 1/2, 1, 2, 3, 4 és ó óra eltelte után az 1. példa szerint az oldatokból mintát veszünk. 1. 25 mg zsírmentesített búzakorpát (Shilch-tól származó búzakorpát acetonnal kezelünk és szárítunk), továbbá 4,5 ml 0,1 mól-os 6,0 pH-jú káliumfoszfát puffer-oldatot és 0,5 ml 5 mg/ml 6-D-(—)-a-a minő-a-(p-a cetoxi-fenilacetamido)-2,2-dimetil-penám-3-karbonsav (p-acetoxiampicillin) fenti pufferral készült oldatát elegyítjük. 2. 25 mg zsírmentesített búzakorpát, 4,5 ml 0,1 mól-os 7,0 pH-jú káliumfoszfát puffer-oldatot és 0,5 ml 5 mg/ml p-acetoxiampicillinnek fenti pufferral készült oldatát elegyítjük. 3. 25 mg zsírmentesített búzakorpát, 4,5 ml 0,1 mól-os 7,5 pH-jú káliumfoszfát puffer-oldatot és 0,5 ml 5 mg/ml p-acetoxiampicillinnek fenti puffer - ral készült oldatát elegyítjük. 4. 50 mg zsír mentesített búzakorpát 4,5 ml 0,1 mólos 6,0 pH-jú káliumfoszfát puffer oldatot és 0,5 ml 5 mg/ml p-acetoxiampicillinnek fenti puffernd készült oldatát elegyítjük. 5. 50 mg zsírmentesített búzakorpát, 4,5 ml 0,1 mólos 7,0 pH-jű káliumfoszfát puffer oldatot és 0,5 ml 5 mg/ml p-acetoxiampicillinnek fenti pufferral készült oldatát elegyítjük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
