173535. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(alfa-amino-adipoil)-amino-3-metil-3-cefém-4-karbonsav fermentációs úton történő előállítására
23 173535 24 (a) Egy 200 ml-es rázólombikba beadagolunk 30 ml olyan táptalajt, amely 8% glükózt, 2% gyapotmag-lisztet, 1% kálcium-karbonáíot és a 7. táblázatban megadott anyagot tartalmaz. Sterilizálás után mindegyik táptalajt beoltjuk a Paecilomyces carneus C-2237 (IFO-9729) törzs spóráival és keverés közben 24°C-on 168 óra hosszat inkubáljuk. A fermentáció után a fermentlevet centrifugáljuk, majd meghatározzuk a felülúszó DACPC tartalmát. (b) Egy 200 ml-es rázólombikba betöltünk 30 ml olyan táptalajt, amely 8% glükózt, 2% gyapotmag-lisztet, 1% kálcium-kaibonátot és a 7. táblázatban megadott vegyületet tartalmaz. Sterilizálás után mindegyik táptalajt beoltjuk a 8. példa Paecilomyces persicinus C-3009 (IFO-9731) törzs spóráival és keverés közben 24°Con 168 óra hosszat inkubáljuk. A fermentáció után a fermentlevet centrifugáljuk, majd meghatározzuk a felül- 5 úszó DACPC-tartalmát. (c) Egy 200 ml-es rázólombikba beviszünk 30 ml olyan táptalajt, amely 8% glükózt, 2% gyapotmaglisztet, 1% kálcium-larbonátoí és a 7. táblázatoan 10 megadott vegyületet tartalmaz. Sterilizálás után mindegyik táptalajt beoltjuk a Paecilomyces carneus C-4053 (IFO-9730) törzs spóráival és keverés közben 24 °C-on 168 óra hosszat inkubáljuk. A fermentáció után a fermentlevet centri- 15 fugáljuk, majd meghatározzuk a felüiúszó DACPC•tartalmát. Az eredményeket a 7. táblázatban foglaljuk össze. 7. Táblázat Koncentráció Adagolt vegyület a közegben L-ciszteint 0,3% L-cisztin 0,3% DC PC és CPC is képződik melléktermékként. Egy 5 literes fermentorba beviszünk 2,5 liter olyan táptalajt, amilyent az (a) pontban megadtunk, de beadagolunk még 0,3% L-ciszteint is. Sterilizálás után beoltjuk a Paecilomyces carneus C-2237 (IFO-9729) törzs spóráival és az (a) pontban leírt módon tenyésztjük. A további kezelést az 1. példában megadott módon végezzük és így 2 liter tenyész-szűrlet 0210 g kristályos DACPC-nátriumsót eredményez. DCPC és CPC is keletkezik melléktermékként. 9. példa Egy 2 literes rázólombikba beviszünk 500 ml olyan táptalajt, amely 5% szacharózt, 1% gyapotmag-lisztet, 3% kukoricalekvárt és 0,15% kálcium-karbonátot tartalmaz. Sterilizálás után beoltjuk Anixiopsis peruviana CBS-301.67 tenyészettel és utána 28 °C-on 96 óra hosszat inkubáljuk. Egy 50 literes fermentorba betöltünk 30 liter olyan táptalajt, amely 8% glükózt, 2% gyapotmag-lisztet, 0,5% DL-metionint és 1% kálcium-karbonátot tartalmaz. A közeget ezután sterilizáljuk és a szokásos módon lehűlni hagyjuk, majd sterilen beoltjuk a fenti tenyészettel. Utána 28 °C-on inkubáljuk keverés és levegőztetés közben (levegőztetés: 30 liter/perc) 184 óra hosszat. Ezt követően a keletkező táptalajt szűréssel elkülönítjük és így micéliumot lápunk, továbbá 25 liter Törzsek Paecilomyces Paecilomyces Paecilomyces carneus persicinus carneus C-2237 C-3009 C4053 520 ug/ml 310 ug/ml 110 ug/ml 400 ug/ml 220 ug/ml 85 ug/ml 160 ug/ml 90 ug/ml 30 ug/ml 35 tenyész-szűrlethez jutunk. Ez a szűrlet 130 ug/ml DACPC-t, 25 ug/ml DCPC-t és 5 ug/ml CPC-t tartalmaz. A tenyész-szűrlet 1. példa szerinti kezelésének eredményeképpen 0,650 g kristályos DACPC-nát- 40 riumsót kapunk. (Tisztaság: >99%) 10. példa 45 Egy 5 literes fermentorba beviszünk 2,5 liter olyan táptalajt, amely 8% glükózt, 2% gyapotmag-lisztet, 0,5% DL-metionint, 0,3% L-ciszteint és 1% kálcium-karbonátot tartalmaz. Sterilizálás után beoltjuk az Anixiopsis peruviana CBS-301.67 törzs 50 spóráival és 28 °C-on 168 óra hosszat inkubáljuk, eközben 250 ug/ml DACPC halmozódik fel a táptalajban. 2000 ml szűrlet 1. példa szerinti feldolgozása után 0,10 g kristályos DACPC-nátriumsót kapunk 55 Melléktermékként DCPC és CPC is keletkezik. 11. példa 60 Egy 5 literes fermentorba betöltünk 2,5 liter olyan táptalajt, amely 8% glükózt, 2% gyapotmag-lisztet, 0,5% DL-metionint, 03% L-cisztint és 1% kálcium-karbonátot tartalmaz. Sterilizálás után beoltjuk az Anixiopsis peruviana CBS-301.67 törzs 65 spóráival és 28 °C-on 168 óra hosszat inkubáljuk, 12
