173366. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szteroidok mikrobiológiai oxidálására

9

173366

1. példa

A következő összetételű oltóközeget állítjuk elő:

1,0% élesztőkivonat,

1,0% hűskivonat, 5

1,0% pepton, és a többi víz.

Az oltóközeg pH-értékét nátriumhidroxid-oldattal

7,0-re állítjuk be. 100 ml oltóközeget 500 ml-es rázólombikba töltünk és 15 percig 120°-on sterilizáljuk, majd lehűtjük. Ezután a közeget beoltjuk Arthrobac- 10 ter simplex (IÁM 1660) mikroorganizmussal és 48 óra hosszat 28°-on 7 cm löketű rázógépen 130/perc lengéssel inkubáljuk.

Az oltóközeggel azonos összetételű főfermentációs 15 táptalajt készítünk, amely azonban az I. táblázatban megadott mennyiségű gyapot magolaj at tartalmaz. A főfermentációs táptalaj pH-értékét nátriumhidroxidoldattal 7,0-ra állítjuk be. A főfermentációs táptalajból 50 ml-t 500 ml-es rázólombikba helyezünk. A 20 lombikot 20 percig 120°-on sterilizáljuk, majd lehűt-I. táblázat

jük. Ezután a lombik tartalmát 2 ml fenti oltótenyészettel beoltjuk, és 7 cm löketű rázógépen 130/perc lengéssel 30°-on inkubáljuk.

Az inkubáció kezdetétől számított 20 óra múlva a táptalajhoz 2 ml vízben szuszpendált 150 mg koleszterint adunk. Az inkubáció kezdetétől számított 28 óra múlva 4,0 mg 2,2’-dipíridilt adunk hozzá. A 2,2’-dipiridil hozzáadása után 85 órával az inkubációt megszakítjuk. A fermentlevet 150 ml etilacetáttal extraháljuk. az etilacetátos kivonatot bepároljuk, a maradékot kovasavgélen kromatografáljuk, és 1:1 arányú benzol aceton eleggyel eluálva az ADD-t a közbülső oxidációs termékektől és a kiindulási szteroidtól elválasztjuk. Az ADD kitermelését az I. táblázatban közöljük.

A fentiek szerint járunk el, de kiindulási szteroidként /3-szitoszterin és kampeszterin 2:1 arányú keverékét, sztigmaszterint, koleszt-4-én-3-ont vagy koleszta-l,4-dién-3-ont használunk koleszterin helyett. Az eljárást gyapotmagolaj hozzáadása nélkül is megismételjük. Az eredményeket az I. táblázatban adjuk meg.

10

Kísérlet

Szubsztrátum

Gyapotmagolaj ADD-kitermelés koncentráció

(s%) (mg)

Maradék

szubsztrátum

(mg)

1.

koleszterin

0

4,7

53,2

2.

koleszterin

0,15

5,2

45,3

3.

koleszterin

0,3

12,6

25,3

4.

koleszterin

0,5

15,7

18,7

5

koleszterin

0,7

18,8

7,5

6.

koleszterin

1,0

25,8

0

7.

koleszterin

1,5

27,2

0

8.

koleszterin

2,5

20,8

2,2

9.

koleszterin

3,0

16,4

10,2

10.

koleszterin

3,5

13,5

12,8

11.

koleszterin

4,0

10,0

13,6

12.

szitoszterin+kampeszterin

(2:1)

0

2,0

75,0

13.

szitoszterin+kampeszterin

(2:1)

0,3

b,8

50,0

14.

szitoszterin+kampeszterin

(2:1)

0,5

6,9

48,8

15.

szitoszterin+kampeszterin

(2:1)

1,5

9,7

35,8

16.

sztigmaszterin

0

1,0

88,8

17.

sztigmaszterin

1,5

4,2

50,3

18

koleszt-4-én-3-on

0

8,4

17,5

19.

koleszt-4-én-3-on

1,5

21,3

8,5

20.

koleszta-1,4-dién-3-on

0

6,9

12,6

21.

koleszta-1,4-dién-3-on

1,5

15,5

10,8

55

2. példa

A következő összetételű táptalajt állítjuk elő:

2,0% répacukor,

1,0% nátriumnitrit, 60

1,0% élesztőkivonat,

0,25% dikáliumhidrogénfoszfát,

0,03% kristályos magnéziumszulfát.

A táptalajhoz a II. táblázatban megadott mennyiségű zsírt adunk. A táptalaj többi része víz. A táptalaj 65

pH-értékét nátriumhidroxid-oldattal 7,0-re állítjuk be. 500 ml táptalajt 500 ml-es rázólombikba helyezünk. A lombikot 10 percig 120°-on sterilizáljuk, majd lehűtjük. Ezután a lombik tartalmát beoltjuk az 1. példa szerint előállított 1 ml oltótenyészettel, azonban Arthrobacter simplex (IÁM 1660) Brevibacterium lipolyticum (IÁM 1398) mikroorganizmust használunk. Az oltóközeget 30°-on az 1. példa szerint rázógépen inkubáljuk. 15 óra múlva hozzáadunk 200 mg koleszterint. Az inkubáció kezdetétől számított

5