173366. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szteroidok mikrobiológiai oxidálására
21 173366 22 XI. táblázat Kísérlet zsír és olajos magliszt Koncentráció ADD kitermelés ___________________________________________________s%______________mg 1. adalék nélkül 0 4 2. azójababolaj 0,5 6 3. tepce magolaj 0,5 6 4. .szójababliszt 3,0 9 5. repcemagliszt 3,0 9 6. s«ÿababliszt + szójababolaj 3,0 + 0,5 12 7. repcetnágolaj + repcemagliszt 0,5 + 3,0 13 14. példa Ez a példa az ADD kitermelésének növekedését 15 szemlélteti a táptalajhoz szójaolaj hozzáadására. A következő összetételű oltóközeget állítjuk elő: 2,0 % n-paraffin (fő komponens Ci 4), 0,5 ammóniumszulfát, 0,25% dikáiiumhidrogénfoszfát, 20 0,1 % kristályos magnéziumszulfát, 0,5 % kukoricalekvár és a többi víz. Az oltóközeg pH-értékét nátriumhidroxid-oldattal 7,5-re állítjuk be. 100 ml oltóközeget 500 ml-es rázólombikba töltünk és a lombikot autoklávban 20 per- 25 cig 120°-on sterilizáljuk, majd lehűtjük. Az oltóközeget beoltjuk Nocardia minima (ATCC 19 150) mikroorganizmussal és a beoltott közeget 48 óra hosszat 30°-on az 1. példa szerint rázókészülékben inkubáljuk. 30 A következő összetételű főfermentációs táptalajt állítjuk elő: 4,0% szójaliszt, 1,0% élesztő, 35 0,2% nátriumnitrát, 0,2% dikáiiumhidrogénfoszfát, 0,1% kristályos magnéziumszulfát, 1,0% szójaolaj és a többi víz. 40 A közeg pH-értékét nátriumhidroxid-oldattal 7,0-re állítjuk be. 50 ml táptalajt 500 ml-es rázólombikba töltünk. A lombikot autoklávban 20 percig 120°-on sterilizáljuk, majd lehűtjük. A táptalajt 7 ml fenti oltóközeggel beoltjuk, és az 1. példában leírt módon 45 rázókészülékben 30°-on inkubáljuk. A főfermentáció beindításától számított 20. óra végén 250 mg koleszterint adunk a táptalajhoz. A főfermentáció megindításától számított 28. óra végén 3,9 g 2,2’-bipiridilt adunk a táptalajhoz, és a 2,2’-bipiridil hozzáadásától 50 számított 80. óra végén a fermentációt megállítjuk. A fermentlevet az 1. példában leírt módon dolgozzuk fel. Az ADD kitermelését a XII. táblázatban közöljük. 55 A fenti eljárást megismételjük azzal az eltéréssel, hogy a táptalajhoz szójaolajat nem adunk. Az ADD kitermelését a XII. táblázatban adjuk meg-60 A fenti eljárást megismételjük és mikroorganizmusként Nocardia madurae (ATCC 19 425), Nocardia corallina (IFO 3338) és Nocardia lutea (ATCC 21 291) törzseket használunk. A kapott eredményeket a XII. táblázatban közöljük. 65 XII. táblázat Mikroorganizmus Szója-ADD olaj kitermelés súly% mg Nocardia minima (ATCC 19 150) 0 4 1,0 7 N oardia madurae (ATCC 19 425) 0 2 1,0 6 Nocardia corallina (IFO 3338) 0 3 1,0 5 Nocardia lutea (ATCC 21 291) 0 4 1,0 9 15. példa Ez a példa a szójaolaj-adalék hatását szemlélteti az ADD kitermelésére. A következő összetételű oltóközeget állítjuk elő: 1,0% szőlő cukor, 0,3% húskivonat, 1,0% pepton, 0. 5% nátriumklorid és a többi víz. Az oltóközeg pH-értékét nátriumhidroxid-oldattal 7,2-re állítjuk be. 100 ml oltóközeget 500 ml-es rázólombikba töltünk. A lombikot autoklávban 20 percig 120°-on sterilizáljuk, majd lehűtjük. A táptalajt beoltjuk Mycobacterium sp. NRRL B-3683 mikroorganizmussal és 70 óra hosszat 35°-on rázókészülékben az 1. példa szerint inkubáljuk. A következő összetételű főfermentációs táptalajt állítjuk elő: 6.0 % kazein, 0,15% dikáiiumhidrogénfoszfát, 1.0 % szójaolaj, 0,6 % koleszterin és a többi víz. A közeg pH-értékét nátriumhidroxid-oldattal 7,0-re állítjuk. 50 ml táptalajt 500 ml-es rázólombikba töltünk. A lombikot autoklávban 20 percig 120°-on sterilizáljuk, majd lehűtjük. A lombikot beoltjuk 2 ml fenti oltóközieggel és 30°-on rázókészülékben az 1. példa szerint inkubáljuk. A főfermentáció beindításától számított 40. óra végén a fermentációt befejezzük Ezután a fermentlevet az 1. példa szerint feldolgozzuk. Az ADD kitermelését a XIII. táblázatban ismertetjük. 11
