173315. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cink-bacitracin előállítására
5 173315 6 fermentált tenyészetből vákuumdobszűrővel vagy szeparátorral a biomasszát elválasztjuk, majd a szűrlethez cinkszulfátot adva cink-bacitracin-csapadékot képezünk és e terméket porlasztva szárítjuk. A biomassza elválasztását 2,8—4,5 pH-értéken végezhetjük el. Eljárásunk részleteit a példákban ismertetjük. 1. példa A steril inokulum táptalaj összetétele: 4,0% szójaliszt, 1,5% burgonyakeményítő 0,5% kalciumkarbonát ppt., 0,02% MgS04 *7H2 O, 0,002% MnS04*4H20, 0,002% FeS04-7H20, 1,0% pálmaolaj. 6000 ml steril táptalajt (pH:6,9) Bacillus licheniformis HB—601 004 jelű — az Országos Közegészségügyi Intézetnél MNG 00 120 szám alatt letétbe helyezett — törzs spóra-szuszpenziójából 3*106 csírát (500 csíra/ml inokulum táptalaj) tartalmazó szuszpenziójával beoltjuk és 32 °C-on 1 ;1 1 /perc levegőztetés és 500 ford/perc kevertetés mellett 21 óráig inkubáljuk. Erre az időre a korábban kialakult pseudohyphák szétesnek egyedi sejtekre, illetve 2—4 tagú sejtláncokra és a tenyészlé pH-ja 6,4-re savanyodik. Ebből kifejlődött inokulumból 600 ml-t oltunk át az üvegfermentorba, amelyben 6000 ml következő összetételű steril táptalaj van: 6,0% szójaliszt, 2,25% burgonyakeményítő, 0,5% kalciumkarbonát, 0,2%(NH4)2SO4, 0,02% MgS04 • 7H2 0, 0,002% MnS04-4H20, 0,002% FeS04-7H20, 0,5% pálmaolaj, 0,15% antihabzin A/3 sterilezés utáni pH: 6,9. A fermentálást 24 órán át folytatjuk 37 °C-on oly módon, hogy a fermentációt 0—3 órás kora között 500 ford/perc sebességgel keverjük és levegőt a fermentoron nem nyomatunk át. A fermentáció 3—6 órás kora között a kevertetés változtatása nélkül 1:1 1/perc levegőztetést, 6 órás korától a fermentáció befejezéséig 750 ford/perc kevertetést és 1:1 1/perc levegőztetést alkalmazunk. A fermentáció során fellépő habzás esetén a habzás gátlására antihabzin A/3-at alkalmazunk. A fermentáció 24. órájában a bacitracinhozam 570 E/ml. 2. példa Az 1. példa szerint járunk el mindenben, de az alkalmazott B. licheniformis törzs HB—101 035 jelű, mely az Országos Közegészségügyi Intézetnél MNG 00121 szám alatt került letétbe helyezésre. A fermentáció befejezésekor a 24. órában bacitracinhozam 585 E/ml. 3. példa Az 1. példa szerint készített inokulum táptalajt B. licheniformis HB—101 035 jelű — az Országos Közegészségügyi Intézetnél MNG 00 121 szám alatt letétbe helyezett — törzs spóra-szuszpenziójából 3*10® csirát (500 csíra/ml inokulum táptalajt) tartalmazó szuszpenzióval beoltjuk és 32 °C-on 1:11/perc levegőztetés és 500 ford/perc kevertetés mellett 21 órán át inkubáljuk. A kifejlődött inokulumból 600 ml-t oltunk át az üvegfermentorba, melyben 6000 ml következő összetételű steril táptalaj van: 9% szójaliszt, 3,4% burgonyakeményítő, 0,75% kalciumkarbonát, 0,3% (NHL,)S04, 0,03% MgS04*7H20, 0,003% MnS04*4H20, 0,003% FeS04*7H20, 0,5% pálmaolaj és 0,15% antihabzin A/3 (pH:6,9 sterilezés után). A fermentálást 24 órán át folytatjuk 37 °C-on oly módon, hogy a fermentáció 0—3 órás kora között 500 ford/perc sebességgel kevertetünk és levegőt a fermentoron nem nyomatunk át. A fermentáció 3—6 órás kora között a kevertetés változtatása nélkül 1:1 1/perc levegőztetést, a fermentáció 6 órás korától a fermentáció végéig 750 ford/perc kevertetést és 1:1 1/perc levegőztetést alkalmazunk. A fermentáció során fellépő habzás esetén a habzás gátlására antihabzin A/3-at alkalmazunk. A fermentáció 24. órájában a bacitracinhozam 753 E/ml. 4. példa Az 1. példa szerinti táptalaj összetétellel 2000 liter inokulum táptalajt készítünk és beoltjuk a HB-101 035 jelű — az Országos Közegészségügyi Intézetnél MNG 00 121 szám alatt letétbe helyezett — törzs 3. sz. bouillonnai készített 100 ml spóra szuszpenziójával, mely 109 élő csírát tartalmaz. A tenyésztést 32 °C-on végezzük, 90 m2 3/ó levegő áramoltatása mellett. A 16. órás korra kifejlődött inokulummal beoltjuk a 30 m3 teljes térfogatú keverős fermentorban elkészített 20 m3 steril táptalajt, melynek összetétele azonos az 1. példában megadott fermentációs táptalajjal. A fermentáció első 3 órájában 300 m3 /ó, ezután a 6. óráig 600 m3/ó, majd a fermentáció végéig 1200 m3/ó levegőt fúvatunk keresztül a 22 m3 térfogatú tenyészeten, állandó kevertetés mellett. A fermentációs táptalaj pH-ja 6,9, mely - kezdeti csökkenés után — folyamatosan emelkedik és a fermentáció végére (24. ó) pH: 7,95-t éri el. A fermentlé bacitracintartalma 560 E/ml. Az ily módon előállított bacitracin tartalmú fermentlevet 20%-os kénsavval pH: 5,5-re savanyítjuk, hozzáadunk a teljes térfogatra számított 0,4% FeCl3-t, majd 2,8-ra állítjuk be a pH-t. Az így kezelt fermentlevet előréteges vákuumdobszűrőn szűrjük, a szűrés előtt a savanyú fermentléhez adagolószivattyúval — szűrésjavító anyagként - 750 1/óra sebességgel összesen 3000 liter 10%-os (vizes oldatban) Solakrol T-20-t (Budapesti Vegyiművek) adunk. A 4 órán át tartó szűrés után — miközben a dobszűrőn levő biomasszát 1 m3/ó mennyiségű vízzel mossuk - a 23 m3 térfogatú szűrlethez 900 kg ZnS04-t adunk állandó keverés közben. Fél órás kevertetés után az oldat pH-ját 40%-os Na-OH-oldattal 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
