172778. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens valamely szubsztrátum koncentrációjának enzimkinetikus meghatározására
23 172778 24 tumhoz és az enzimatikus reakció sebességét mérjük, azzal jellemezve, hogy legalább egy, szubsztrátum-átalakulás sebességmeghatározó lépésével összehangolt, kompetitiv inhibitort adagolunk a rendszerhez oly módon, hogy a cs szubsztrátum kon- 5 centrációnak a K’M látszólagos Michaelis-állandóhoz való arányát < 0,2 :1 értékre szabályozzuk és beállítjuk a pszeudo-elsőrendű reakció körülményeket, majd a keveréket homogenizáljuk, előre meghatározott időközökben valamely, az átalakulásra spéci- 10 fikus reakcióparaméter változását megállapítjuk és ebből a szubsztrát koncentrációt meghatározzuk. (Elsőbbsége: 1973. október 4.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a cs anyagkoncent- 15 rációnak a K’M látszólagos Michaelis-állandóhoz való arányát <0,05:1, előnyösen <0,01 : 1, értékre állítjuk be. (Elsőbbsége: 1973. október 4.) 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy kom- 20 petitív inhibitorokként olyan anyagokat alkalmazzunk, amelyek az enzimet és/vagy a szubsztrátumot reverzibilisen megkötik anélkül, hogy kémiailag átalakulnának. (Elsőbbsége: 1973. október 4.) 4. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási 25 módja, azzal jellemezve, hogy kompetitiv inhibitorként olyan anyagokat alkalmazunk, amelyek a mérési reakció kiindulási anyagainak és/vagy végtermékeinek egyikéhez kémiailag hasonlók. (Elsőbbsége: 1973. október 4.) 30 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a szubsztrátum koncentrációnak az enzimhez és a kompetitiv inhibitorhoz való arányának szabályozásával a mérésre egy analitikai célokra alkalmas 35 érzékenységet állítunk be. (Elsőbbsége: 1973. október 4.) 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a mérés érzékenységét az enzimkoncentráció 40 növelése és/vagy a reakcióhőmérséklet emelése útján fokozzuk. (Elsőbbsége: 1973. október 4.) 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a mérést közvetlenül az elegy homogenizálása, egy 45 esetleg kialakuló hőmérsékletnövekedés jelentkezése és/vagy egy esetleg fellépő üresjárat lefutása után végezzük. (Elsőbbsége: 1973. október 4.) 8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 50 egy esetleg hosszabban tartó üresjáratot egy vakérték felvételével korrigálunk. (Elsőbbsége: 1973. október 4.) 9. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 55 olyan, a mérendő anyagnak megfelelő puffert alkalmazunk, amelynek a pH-értéke a mérendő anyag összreakciósebességének a pH-sebesség-maximumával lényegében megegyezik. (Elsőbbsége: 1973. október 4.) 60 4 * * 10. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a pszeudo-elsőrendű reakció tartományában egy elemzés-sorozatban minden mérésnél azonos időszakaszban a reakció indulása után egy bizonyos választott idő után mérünk („time fixed”-módszer). (Elsőbbsége: 1973. október 4.) 11. A 10. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy egy elemzés-sorozaton belül a bizonyos választott idő után a mérésre vonatkozó mérési értékek közlését az időszakaszban vagy egy kinetikus időpontmérést az időszakasz elején és a végén vagy a pillanatnyi sebesség meghatározását egy rögzített időpontban végezzük. (Elsőbbsége: 1973. október 4.) 12. A1—9. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a kezdeti sebességet „initial rate”-módszerrel határozzuk meg. (Elsőbbsége: 1973. október 4.) 13. Az 1-12. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganagosítási módja, azzal jellemezve, hogy a kompetitiv inhibitort vagy inhibitorokat és az enzimet egy a mérendő anyaggal összehangolt pufferben oldjuk, a kapott oldatot a szérumhoz hozzáadjuk és ezután egy koszubsztrátumot adunk hozzá. (Elsőbbsége: 1973. október 4.) 14. Az 1-13. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a meghatározandó anyag olyan oldatát alkalmazzuk, amely már egy kompetitiv gátlóhatást mutat. (Elsőbbsége: 1974. augusztus 21.) 15. A 14. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a kompetitiv inhibitort olyan mennyiségben alkalmazzuk, amely az enzim 60% és 95% közötti gátlását okozza. (Elsőbbsége: 1974. augusztus 21.) 16. A 14. vagy 15. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan anyag-oldatot alkalmazunk, amely az enzimet egészen 50%-ig gátolja. (Elsőbbsége: 1974. augusztus 21.) 17. Reagens valamely szubsztituens koncentrációjának enzimkinetikus meghatározására, amely ennek a szubsztrátumnak az enzimkinetikus mérésére szolgáló rendszert tartalmazza, azzal jellemezve, hogy legalább egy kompetitiv inhibitort tartalmaz a mérendő enzim-szubsztrátum reakció számára. (Elsőbbsége: 1973. október 4.) 18. A 17. igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy az enzim és az inhibitor egymással alkotott komplex alakjában van jelen. (Elsőbbsége: 1973. október 4.) 19. A 17. vagy 18. igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy egy szubsztrátum enzimatikus mérésére szolgáló rendszer egy a szubsztrátumra specifikus enzimet, egy, ezzel az enzimmel összehangolt puffert és adott esetben kofaktorokat és/vagy segédenzimeket és/vagy stabilizátorokat tartalmaz. (Elsőbbsége: 1973. október 4.) 4 rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 794055 - Zrínyi Nyomda 12
