172644. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cef-3-em-4-karbonsav-származékok előállítására
19 i /ztm 20 13. példa 3-Hidro ximetil-7ß-(D-5 -amino-5 -karboxi-pentánanüdo)-cef-3-em-4-karbonsav előállítása 5 A 2. példában leírt módon Rhodotorula graminis CBS 2826 mikroorganizmust tenyésztünk. A táptalajhoz indukálószerként 0,1 vegyes % cefalosporin C-t adunk. A kapott tenyészetet a 2. 10 példában ismertetett módon 3-acetoximetil-70-(D-5- -amino-5-karboxi-pentánamido)-cef-3-em-4-karbonsav teljes fermentlevének dezacetilezésére használjuk fel. A reakció 18 óra alatt ér véget, ekkor az elegy 6,45 mg/ml dezacétilezett terméket tartalmaz. A 4 15 liter térfogatú fermentlevet a 2. példában leírt módon extraháljuk. 16,5 g terméket kapunk, amelynek tisztasági foka 73,3% (szabad savra vonatkoztatva). A termék fizikai állandói azonosak a Biochem. J. 81, 591 (1961) közleményben 20 megadottakkal. 14. példa 3-Acetoximetil-7ß-(D-5-amino-5-karboxi- 25-pentánamido)-cef-3-em-4-karbonsav dezacetilezése különböző Rhodotorula fajokkal A példában felhasznált, Rhodotorula nemzetségbeli mikroorganizmus-törzsek (Lődder, The 30 Yeasts, 2. kiadás, 1971) típustenyészeteit a Centraalbureau voor Schímmelcultures intézettől (Delft, Hollandia) szereztük be. 1 1. tábl; A mintákat élesztőkivonat-penton-agar ferde tenyészeten 25 C°-on tovább tenyésztettük. Amikor a mikroorganizmus beborította az agarlemez felszínét, a tenyészetből -mintát vettünk, és a mintákat a primer folyékony tenyészetek oltóanyagaiként használtuk fel. A primer tenyésztést 48 órán át, rázás közben végeztük, majd az így kapott anyagot a szekunder folyékony tenyészetek oltóanyagaként használtuk fel. A szekunder folyékony tenyészetek esetén a primer tenyészeteknél alkalmazottal azonos összetételű táptalajt használtunk fel, a táptalajhoz azonban az enzimaktivitás indukálása céljából 0,1 vegyes % cefalosporin C-t adtunk. A 72 órás inkubálás után kapott tenyészetet használhatunk fel a 3-acetoximetil-70-(D-5-amino-5- -karboxi-pentánamido)-cef-3-em-4-karbonsav (Cephalosporins and Penicillins, szerk: E. Flynn, kiadó: Academic Press (1972) dezacetilezéshez. 5,5 ml 0,1 mólos foszfátpuffer-oldat (pH = 6,0) és 1,0 ml foszfátpuffer-oldattal készített, 10%-os 3-acetoximetil-7/?-(D-5-amino-5-karboxi-pentánamido)-cef-3-em-4-karbonsav-oIdat elegyéhez 0,5 ml élesztő-tenyészetet adtunk. Az elegyből időről-időre mintát vettünk, és a mintákat vékonyrétegkromatográfiás elemzésnek (adszorbens: cellulóz-lemez, eluálószer: 70 térfogat %-os vizes n-propanol) vetettük alá. Az egyes vékonyrétegkromatogramokra összehasonlításként a kiindulási anyag és a végtermék mintáját is felvittük. A 24, illetve 72 óra elteltével végzett vizsgálatok eredményeit az 1. táblázatban közöljük. A számadatok jug/ml koncentrációt jelentenek. Felhasznált Rhodoto- 24 óra 72 óra rula mikroorganizmus Letéti szám Ac. Hidr. Ac. Hidr. R. rubra CBS 17 530 6960 _ 6180 R. aurantiaca CBS 317 6820 1130 3900 2100 R. glutinis var. dairenensis CBS 4406 796 6100 6840 R. glutinis CBS 20-7300 — 7060 R. graminis CBS 2826-7600 — 6780 R. lactosa CBS 5826 6730 1130 5320 1740 R. marina CBS 2365 7000 1130 612 4580 R. minuta CBS 319 5460 1590 4360 2700 R. pallida CBS 320 6320 1130 4260 2320 R. pilimanae CBS 5804 4700 2720 1750 4520 Kontroll (mikroorganizmus nélkül _ 6820 976 5120 1280 10
