172644. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cef-3-em-4-karbonsav-származékok előállítására
13 ÀmKJ-14 a terméket az (a) lépésben leírt módon elkülönítjük. 367 g (86,5%) dezacetilezett terméket kapunk, amely metanollal és nátriumhidrogénkarbonát-oldattal átlátszó oldatot képez. (a)D=136°. A termék ultraibolya, infravörös és NMR-spektruma megegyezik a hiteles mintáéval. (1 121 308 sz. brit szabadalmi leírás.) Az elkülönített élesztőt ezután még hat hidrolízis-lépésben használjuk fel. Valamennyi lépésben a fentihez hasonló hozammal kapunk megfelelő minőségű terméket. 5. példa (6R,7R)-7-[2-(fur-2-il)-2-metoxiimino-acetamido]-cef-3-em-4-karbonsav (szín-izomer) előállítása (a) 1,23 g kálium-dihidrogénfoszfát és 0,144 g dinátrium-hidrogénfoszfát 100 ml vízzel készített oldatában keverés közben 5,0 g (11,0 mmól) (6R,7R)-3-acetoximetil-7-[2-(fur-2-il)-2-metoxiimino-acetamido ]-cef-3-em-4-karbonsav-nátriumsót (783 449 sz. belga szabadalmi leírás) oldunk (a beadagolt só szín-izomer). Az elegyhez 10 g fagyasztott Rhodotorula rubra-szuszpenziót (CBS 6469) adunk, és az elegyet 32 órán át szobahőmérsékleten mechanikus úton keveijük és folyamatosan levegőztetjük. Ekkor a vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat alapján (adszorbens: szilikagél, futattószer: 0,5 mólos nátriumklorid-oldat, a foltokat ultraibolya fényben tesszük láthatóvá) látható, hogy a hidrolízis teljesen végbement. Az élesztősejteket centrifugálással elkülönítjük, és az átlátszó felső folyadékfázist 2 C°-ra hűtjük. Az oldathoz 100 ml 4-metil-pentan-2-ont adunk, majd keverés közben 20%-os vizes ortofoszforsav-oldattal pH = 2,0 értékre savanyítjuk. Az elegyet 3 percig keverjük, majd a terméket gyors ütemben leszűrjük, 2 x 10 ml 4-metil-pentan-2-onnal, 1 x 10 ml telített vizes nátriumklorid-oldattal és 2 x 10 ml 0 C°-os vízzel mossuk, és vákuumban 40 C°-on szárítjuk. 3,25 g (77,5%) (6R,7R)-7-[2-(fur-2-il)-2- -metoxiimino-acetamido]-cef-3-em-4-karbonsavat (szín-izomer) kapunk. A terméket az atmoszférikus nyomású térrel egyensúlyba hozzuk. A termék ultraibolya spektrumában (pH = 6 értékű pufferoldat) 275 nm-nél jelenik meg maximum (í 17 050), az infravörös spektrum, az NMR-spektrum és az elemi analízis adatai alátámasztják a várt szerkezetet (r DMSOd6 = 5,69, 6,08). A termék tisztasági foka. nagynyomású folyadékkromatográfiás mérés alapján 98,2%. (b) A Rhodotorula rubra CBS 6469 mikroorganizmus újrafelhasználása (i) 9,43 g kálium-dihidrogénfoszfát és 23,6 g dinátrium-hidrogénfoszfát 1 liter desztillált vízzel készített oldatában keverés közben 50 g (118,4 mmól) (6R,7R>3-acetoximetü-7-[2-(fur-2-U> -2-metoxiimino-acetamido]-cef-3-em-4-karbonsavat (szín-izomer) oldunk. Az oldat pH-ja körülbelül 6,3. Az oldathoz 200 g fagyasztott Rhodotorula rubra-szuszpenziót (CBS 6469) adunk. Az elegyet mágneses keverővei keveijük, és a folyadék felszíne alá merülő csőből bevezetett levegővel levegőztetjük. A reakció menetét vékonyrétegromatográfiás úton követjük, adszorbensként előre bevont szilikagél-lemezt, futtatószerként 45 : 8 : 2 arányú kloroform-metanol-hangyasav elegyet használunk. A reakció 4 nap elteltével válik teljessé, ezalatt a reakcióelegy térfogata körülbelül 200 ml-re csökken. A mikroorganizmust centrifugálással elválasztjuk, és 2 x 200,ml desztillált vízzel mossuk. A szuszpenció térfogatát desztillált vízzel 1 literre egészítjük ki, és a mikroorganizmus-szuszpenziót félretesszük. A zavaros, sárga felső folyadékfázist kovasavgélen szűrve derítjük. A szűrletben 250 g nátriumkloridot oldunk, majd jégfürdőn 10 C°-ra hütjük, és 1 liter 4-metil-pentan-2-ont adunk hozzá. Az elegyet gyors keverés közben 60 ml 20%-os ortofoszforsav-oldattal pH = 2,0 értékre savanyítjuk. A pH = 2,0 értékű elegyet 5 percig keverjük, majd a szilárd anyagot leszűrjük, 4-metil-pentan-2-onnal, telített vizes nátriumklorid-oldattal és hideg vízzel mossuk, és 65 órán át vákuumban 40 C°-on szárítjuk. 35,33 g (78,2%X6R,7R)-3-hidroximetil-7-[2-(fur-2-il)-2-metoxiimino-acetamido]-cef-3-em-4-karbonsavat (szín-izomer) kapunk. A terméket egyensúlyba hozzuk az atmoszférikus nyomású térrel. A termék fizikai állandói a következők: (a)j)0 = +75° (c = 1%, dimetilszulfoxidban), víztartalom: 3,3%, 3,6%, tisztasági fok (nagynyomású folyadékkromatográfiás úton mérve): 99,2%. ii) 9,43 g kálium-dihidrogénfoszfát és 23,6 g dinátrium-hidrogénfoszfát 1 liter desztillált vízzel készített oldatában 50 g (118,4 mmól) (6R,7R)- 3- acetoximetil-7-[2-(fur-2-il)-2-metoxiimino-acetamido]-cef-3-em-4-karbonsavat (szín-izomer) oldunk, és az oldathoz hozzáadjuk a (b) i) lépésben elkülönített Rhodotorula rubra-szuszpenziót (CBS 6469). Az elegyet rozsdamentes acélból készült lapátkeverővei erélyesen keverjük, és a szuszpenzión levegőt buborékoltatunk keresztül. Vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat alapján a reakció 65 óra elteltével ér véget. A mikroorganizmust centrifugálással elkülönítjük és 200 ml desztülált vízzel mossuk. A felső folyadékfázist kovasavgélen keresztül szűrve derítjük. A szűrletben 150 g nátriumkloridot oldunk, majd az oldatot 10C-ra hűtjük és 500 ml 4-metil-pentan-2-onnal elegyítjük. Az elegyet erélyes keverés közben 20%-os ortofoszforsav-oldattal pH = 2,0 értékre savanyítjuk. 5 perces keverés után az elegyet szűrjük, a szilárd anyagot 4-metil-pentan-2-onnal és hideg vízzel mossuk, majd 18 órán át vákuumban, 40C°-on szárítjuk. 37,28 g (82,6%) ( 6R ,7R)-3-hidroximetil-7-[2-(fur-2-il)-2-metoxiimino-acetamido]-cef-3-em-4-karbonsavat (szín-izomer) kapunk. A terméket 24 óra alatt egyensúlyba hozzuk az atmoszférikus nyomású térrel. A termék fizikai állandói a következők: (a)o0 = +73,5° (c = l%, dimetilszulfoxidban), víztartalom: 3,4%, 3,0%, tisztasági fok (nagynyomású folyadékkromatográfiás úton mérve): 99,0%. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
