172644. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cef-3-em-4-karbonsav-származékok előállítására
23 172644 24 3000 fordulat/perc sebességen centrifugáljuk. A felső folyadékfázist dékántálással elkülönítjük, IS percig 3000 fordulat/perc sebességgel újra centrifugáljuk, majd steril azbesztlemezen szűrjük. A kapott steril oldattal 7{D-5-amino-5-karboxi-pentánamido)-3-acetoximetil-cef-3-em-4-karbonsav [Cephalosporins and Penicillins, szerk.: E. Flynn, kiadó: Academic Press (1972)] pufferoldattal készített, 25 C°-os oldatát oltjuk be. 1,0 ml 10%-os 7 -0>5-amino-5-karboxi-pentánarnido)-3-acetoximetil-cef-3-em-4-karbonsav-oldat és 1,0 ml 1 mólos foszfátpufíer-oldat (pH = 6,0) elegyéhez 8j0ml steril folyadékot töltünk. 90 órás inkubálás után az elegy 3,3 mg/ml dezacetilezett tornácét tartalmaz, míg az azonos körülmények között, azonban enzimtartalmú folyaddc nélkül végzett kontroli-kísérletben az elegy végtermék-koncentrációja, mindössze 0,7 mg/ml. I A dezacetilezett termék fizikai állandói megegyeznek a Biochem. J.l 81, S91 (1961) közleményben megadottakkal. v-19. példa 70-(D-5-Amino-5-karboxi-pentánamido)-7o-metoxi-3-hidroximetil-cef-3-em-4- -karbonsav előállítása 0,12 ml 0,1 mólos káliumfoszfát-pufferoldat (pH * 6))) és 50 mg 70-0>5-amino-5-karboxi-pentánamído)7a-metoxi-3^cetoximetil-cef-3-em-4-karbonsav[J. Am. Chem. Soc. 93, 2308 (1971)] elegyéhez 30mg nedves súlyú, fagyasztott Rhodotorula rabra CBS 6469 szuszpenziót adunk, és a rendszert 48 órán át 20 C°-on inkubáljuk. 48 óra elteltével a sejteket centrifugálással elkülönítjük, és a felső folyadékfázist csökkentett nyomáson 0,2 ml végtérfogatra betöményftjük. A koncentrátumhoz 1,15 ml acetont adunk, és az elegyet 3 órán át 4C°-on tartjuk. A kivált kristályos 7/5-0>5-amino-5-karboxi- pent ána mido>7a-metoxi-3-hidroxlmetil-cef-3-em-4- -karbonsavat leszűrjük. 32 mg termâcet kapunk, amely vékonyrétegkromatográfiás elemzés alapján (adszorbens: cellulóz-lemez, futtatószer: 5:1:2 arányú n-propanol/ecetsav/víz elegy) azonos a hiteles mintával [J. Am. Chem. Soc. 93, 2308 (1971)]. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás (II) általános képletű 3-hidroximetil-cef-3-em-4-karbonsav-származékok előállítására —ahol R1 jelentése amino-csoport vagy valamely 1-20 szénatomos karbonsavval képezett adlamido-csoport, R2 jelentése hidrogénatom, rövidszénláncú aOdl-csoport, rövidszénláncú aücoxi-csoport, rövidszénláncú alkiltio-csoport rogy rövidszénláncú alkanoil-csoport, és B jelentése =S vagy =SO csoport -0) általános képletű vegyületek - ahol R1, R2 és B jelentése a fenti, és az R3-CO- csoport rövidszénláncú alkanoil-csoportot, rövidszénláncú alkenoil-csoportot, vagy aroil-cso portot (előnyösen benzoil-csoportot) jelent — enzimes hidrolízise útján, azzal jellemezve, hogy enzimként valamely ^Rhodotorula-nemzetségbeli élesztő-mikroorganizmus tenyésztése* során termelt észterázt alkalmazunk. (Elsőbbsége: 1974. május 6.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan 0) általános képletű vegyületekből indulunk ki, ahol R2 jelentése hidrogénatom, B jelentése =S csoport, és R1 és R3—CO— jelentése az 1. igénypontban megadott. (Elsőbbsége: 1974. május 6.) 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan (I) általános keletű, vegyületekből indulunk ki, ahol R2, R-CO- és B jelentése az 1. igénypontban megadott, és R1 jelentése D-5-amino-5-karboxi-pentánamido-csoport, a nitrogénatomon védőcsoportként előnyösen rövidszénláncú alkil-, fenil-rövidszénláncú alkil-, fenil-, 2,4-dinitro-fenil-, rövidszénláncú alkanoil-, halogénezett rövidszénláncú alkanoil-, benzoil-, rövidszénláncú alkoxikarbonil-, fenil-rövidszénláncú alkoxikarbonil- vagy ftaloil-védőcsoportot hordozó D-5-amino-5-karboxi-pentánamido-csoport, 4-karboxi-butánamido-csoport, formamido-csoport, valamely R (CHj )n—CONH— általános képletű csoport (ahol R jelentése fenil-csoport, naftil-csoport, egy vagy több halogén-, hidroxil-, rövidszénláncú alkil-, nitro-, amino-, rövidszénláncú alkanoil-, rövidszénláncú alkoxi - és/vagy rövidszénláncú alkiltio-szubsztituenst hordozó fenil-csoport, tienil-csoport, furil-csoport, piridil-csoport, fenoxi-csoport, feniltio-csoport, 5-metil-l ,3,4-tiadiazol-2-il-tio-csoport vagy benziltio-csoport, és n 1 és 4 közötti egész számot jelent), valamely (a) . általános képletű csoport (ahol R» jelentése fenil-csoport, naftil-csoport, egy vagy több halogén-, hidroxil-, rövidszénláncú alkil-, nitro-, amino-, rövidszénláncú alkanoil-, rövidszénláncú alkoxiés/vagy rövidszénláncú alkihio-szubsztituenst hordozó fenil-cső port, tienil-csoport, furil-csoport vagy piridil-csoport, és X jelentése anúno-csoport, védőcsoportként előnyösen a D-S-amino-S-karboxi-pentánamido-csoport védőcsoportjainál felsorolt csoportokat hordozó védett amino-csoport, karboxil-csopwt, rövidszénláncú alkoxikarbonil-csoport vagy hidroxil-csoport), vagy valamely (b) általános képletű csoport (ahol R* jelentése a fenti, és Rb jelentése hidrogénatom, rövidszénláncú alkanoil-csoport, rövidszénláncú alkil-csoport, 5—7 szénatomos cikloalkil-csoport, fenil-csoport, benzil-csoport vagy fenetil-csoport). (Elsőbbsége: 1974. május 6.) 4. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan 0) általános képletű vegyületekből indulunk ki, ahol R2, R- —CO- és B jelentése az 1. igénypontban megadott, és R1 jelentése D-5-benzoilamino-5-karboxi-pentánamido-csoport, tienilacetamido-cső port, 2-hidroxi-2-fenil-acetamido-csoport, 2-terc-butoxikarbonilamino-2-fenil-acetamido-csoport, vagy szín-2-furil-2-metoxümino-acetamido-csoport. (Elsőbbsége: 1974. május 6.) s 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 12
